Цитохимия клеток эритроидного ряда
Цитохимические реакции наряду с биохимическим анализом широко применяются для исследования эритроидных клеток в диагностических целях. Нами выявлены следующие особенности этих клеток.
В норме ядерные клетки красного ряда дают положительную реакцию на кислую фосфатазу и неспецифическую а-нафтилацетат эстеразу и остаются неокрашенными при ШИК-реакции и при реакции на щелочную фосфатазу.
Наибольшая активность кислой фосфатазы отмечается в эритробластах, по мере созревания эритроидных клеток активность кислой фосфатазы в них уменьшается. Количество эритроцитов, положительных на кислую фосфатазу, в норме составляет 1,21% (подсчет на 100 000 эритроцитов), по данным В. В. Соколова, Р. П. Нарциссова, Л. А. Ивановой.
Активность неспецифической а-нафтилацетат эстеразы также высока в эритробластах. Она выявляется в виде интенсивного диффузного окрашивания околоядерной зоны. При созревании эритроидных клеток активность этого фермента снижается и в норме лишь в единичных эритроцитах можно обнаружить 1-2 гранулы продукта реакции. Однако у новорожденных, у которых число ретикулоцитов в крови увеличено, активность а-нафтилацетат эстеразы выявляется в 20°/о! эритроцитов в виде 1-3, иногда больше, гранул продукта реакции.
При анемиях различной этиологии, лейкозе, гипоксических состояниях (врожденные пороки сердца) число эритроцитов, положительных на а-нафтилацетат эстеразу, увеличивается, причем наибольший процент эритроцитов (до 90%), дающих положительную реакцию, наблюдается у детей с врожденными пороками сердца синего типа. Активность а-нафтилацетат эстеразы в эритроцитах полностью ингибируется эзерином.
Гликоген в клетках эритроидного ряда в нормальных условиях не выявляется. Положительная реакция на гликоген всегда свидетельствует о патологии. Особое значение эта реакция имеет для диагностики эритролейкоза, когда в эритробластах появляются гранулы ШИК-положительного материала (крупные или средней величины) или интенсивное диффузное окрашивание. Однако надо учесть, что эта реакция бывает положительной при талассемии, а у взрослых при анемии Аддисон-Бирмера.
При реакции с суданом черным Б в клетках эритроидного ряда наблюдается слабое диффузное окрашивание, не имеющее диагностического значения.
Цитохимическое и биохимическое исследование эритроцитов имеет большое значение в диагностике гемолитических анемий. Цитохимическое определение активности Г-6-ФДГ по методу Hess и соавторов широко используется для выявления дефицита этого фермента в эритроцитах. По данным С. М. Дульциной, при этой цитохимической реакции эритроциты, не содержащие гранул продукта реакции (формазана), в крови здоровых людей не встречались: в среднем 12Д% эритроцитов содержали до 10 гранул формазана, 79,2% эритроцитовот 11 до 20 гранул, а 8,2% эритроцитов - свыше 21 гранулы. Содержание Г-6-ФДГ в эритроцитах не зависит от пола и возраста.
При дефиците Г-6-ФДГ в эритроцитах нарушается способность превращения окисленного глютатиона в восстановленный, в результате эритроциты легко подвергаются гемолизу под влиянием окисляющих агентов. При наследственном дефиците Г-6-ФДГ гемолитические кризы могут развиваться после приема некоторых лекарств, а также после попадания через пищевые продукты или вдыхания пыльцы бобов Vicia fava (фавизм).
Содержание восстановленной формы глютатиона в эритроцитах определяется с помощью цитохимической реакции по Барнетту, Зелигману с использованием диокси-диметил-дисульфана. В результате этой реакции эритроциты приобретают диффузную красно-лиловую окраску, интенсивность которой у здоровых людей, как правило, соответствует + + + и не зависит от пола и возраста. У больных гемолитическими анемиями, связанными с дефицитом Г-6-ФДГ, обнаруживается снижение интенсивности окраски эритроцитов.
Биохимические методы используются для определения таких ферментов эритроцитов, как глютатионредуктаза, пируваткиназа, дифосфоглицератмутаза, триозофосфатизомераза, аденоэинтрифосфатаза, альдолаза, метгемоглобинредуктаза, ацетилхолинэстераза, дегидрогеназы лактата, малата, изоцитрата и т. д.. Большая группа гемолитических анемий связана с дефицитом тех или иных ферментов эритроцитов.
Негеминовое железо в эритроидных клетках выявляется с помощью реакции берлинской лазури в виде зерен диаметром 0,2-1,5 мкм (железосодержащие гранулы). Нормоциты, содержащие такие зерна, называются сидеробластами, а эритроциты - сидероцитами. В норме 15- 40% нормоцитов костного мозга могут содержать железоположительные гранулы, у здоровых грудных детей сидеробласты составляют 25-80% от всего количества нормоцитов. В крови детей старшего возраста и взрослых в норме от 0 до 3% эритроцитов содержат железоположительные гранулы. У новорожденных, по данным И. Тодорова, процентное содержание сидероцитов в крови повышено (от 3 до 17%), но к 2-3-му дню жизни оно снижается до нормального уровня. Повышение содержания сидероцитов в крови характерно для сидероахрестических анемий.
В норме ядерные клетки красного ряда дают положительную реакцию на кислую фосфатазу и неспецифическую а-нафтилацетат эстеразу и остаются неокрашенными при ШИК-реакции и при реакции на щелочную фосфатазу.
Наибольшая активность кислой фосфатазы отмечается в эритробластах, по мере созревания эритроидных клеток активность кислой фосфатазы в них уменьшается. Количество эритроцитов, положительных на кислую фосфатазу, в норме составляет 1,21% (подсчет на 100 000 эритроцитов), по данным В. В. Соколова, Р. П. Нарциссова, Л. А. Ивановой.
Активность неспецифической а-нафтилацетат эстеразы также высока в эритробластах. Она выявляется в виде интенсивного диффузного окрашивания околоядерной зоны. При созревании эритроидных клеток активность этого фермента снижается и в норме лишь в единичных эритроцитах можно обнаружить 1-2 гранулы продукта реакции. Однако у новорожденных, у которых число ретикулоцитов в крови увеличено, активность а-нафтилацетат эстеразы выявляется в 20°/о! эритроцитов в виде 1-3, иногда больше, гранул продукта реакции.
При анемиях различной этиологии, лейкозе, гипоксических состояниях (врожденные пороки сердца) число эритроцитов, положительных на а-нафтилацетат эстеразу, увеличивается, причем наибольший процент эритроцитов (до 90%), дающих положительную реакцию, наблюдается у детей с врожденными пороками сердца синего типа. Активность а-нафтилацетат эстеразы в эритроцитах полностью ингибируется эзерином.
Гликоген в клетках эритроидного ряда в нормальных условиях не выявляется. Положительная реакция на гликоген всегда свидетельствует о патологии. Особое значение эта реакция имеет для диагностики эритролейкоза, когда в эритробластах появляются гранулы ШИК-положительного материала (крупные или средней величины) или интенсивное диффузное окрашивание. Однако надо учесть, что эта реакция бывает положительной при талассемии, а у взрослых при анемии Аддисон-Бирмера.
При реакции с суданом черным Б в клетках эритроидного ряда наблюдается слабое диффузное окрашивание, не имеющее диагностического значения.
Цитохимическое и биохимическое исследование эритроцитов имеет большое значение в диагностике гемолитических анемий. Цитохимическое определение активности Г-6-ФДГ по методу Hess и соавторов широко используется для выявления дефицита этого фермента в эритроцитах. По данным С. М. Дульциной, при этой цитохимической реакции эритроциты, не содержащие гранул продукта реакции (формазана), в крови здоровых людей не встречались: в среднем 12Д% эритроцитов содержали до 10 гранул формазана, 79,2% эритроцитовот 11 до 20 гранул, а 8,2% эритроцитов - свыше 21 гранулы. Содержание Г-6-ФДГ в эритроцитах не зависит от пола и возраста.
При дефиците Г-6-ФДГ в эритроцитах нарушается способность превращения окисленного глютатиона в восстановленный, в результате эритроциты легко подвергаются гемолизу под влиянием окисляющих агентов. При наследственном дефиците Г-6-ФДГ гемолитические кризы могут развиваться после приема некоторых лекарств, а также после попадания через пищевые продукты или вдыхания пыльцы бобов Vicia fava (фавизм).
Содержание восстановленной формы глютатиона в эритроцитах определяется с помощью цитохимической реакции по Барнетту, Зелигману с использованием диокси-диметил-дисульфана. В результате этой реакции эритроциты приобретают диффузную красно-лиловую окраску, интенсивность которой у здоровых людей, как правило, соответствует + + + и не зависит от пола и возраста. У больных гемолитическими анемиями, связанными с дефицитом Г-6-ФДГ, обнаруживается снижение интенсивности окраски эритроцитов.
Биохимические методы используются для определения таких ферментов эритроцитов, как глютатионредуктаза, пируваткиназа, дифосфоглицератмутаза, триозофосфатизомераза, аденоэинтрифосфатаза, альдолаза, метгемоглобинредуктаза, ацетилхолинэстераза, дегидрогеназы лактата, малата, изоцитрата и т. д.. Большая группа гемолитических анемий связана с дефицитом тех или иных ферментов эритроцитов.
Негеминовое железо в эритроидных клетках выявляется с помощью реакции берлинской лазури в виде зерен диаметром 0,2-1,5 мкм (железосодержащие гранулы). Нормоциты, содержащие такие зерна, называются сидеробластами, а эритроциты - сидероцитами. В норме 15- 40% нормоцитов костного мозга могут содержать железоположительные гранулы, у здоровых грудных детей сидеробласты составляют 25-80% от всего количества нормоцитов. В крови детей старшего возраста и взрослых в норме от 0 до 3% эритроцитов содержат железоположительные гранулы. У новорожденных, по данным И. Тодорова, процентное содержание сидероцитов в крови повышено (от 3 до 17%), но к 2-3-му дню жизни оно снижается до нормального уровня. Повышение содержания сидероцитов в крови характерно для сидероахрестических анемий.