Лабораторные исследования при диагностике болезней дыхательной системы



В результате такой окраски часть бактерий, несмотря на воздействие спиртом, сохраняет фиолетовый цвет - это так называемые грам-положительные бактерии, другая же часть бактерий теряет в этих условиях фиолетовую окраску и дополнительно окрашивается в розовый цвет - это грам-отрицательные бактерии. Поэтому-то важным моментом и является обесцвечивание мазка: если передержать его в спирту, все бактерии потеряют первоначальный цвет, если же воздействие спиртом окажется недостаточным, все они будут выглядеть как грам-положительные.

Из бактерий, встречающихся в мокроте и обнаруживаемых при окраске по Граму, практическое значение имеют следующие виды их:

а). Пневмококк, или ланцетовидный капсульный диплококк Френкель-Вексельбаума, встречается главным образом при крупозной пневмонии, но может быть обнаружен и при лобулярной пневмонии и иногда, как дополнительная инфекция, при туберкулезе. Это парный кокк, не имеющий правильной круглой формы, а заостряющийся кнаружи и закругленный кнутри («пламя свечи»), грам-положителен. В свежей мокроте удается видеть капсулу в виде светлого ободка. Значительный практический интерес, в связи с серотерапией пневмоний, представляет изучение типа, к которому относится пневмококк. В настоящее время установлено существование четырех типов пневмококка, морфологически неотличимых. Диагноз ставится путем заражения животных и последующей реакции агглютинации. Пневмококки, относящиеся к I, II, и III типам, агглютинируются только сыворотками соответствующей группы. Тип IV неоднороден и обозначается как тип X.

Определение типа пневмококка, помимо реакции атглютинации, ориентировочно производится также более простым, но и менее точным способом Нейфельда (Neufeld), основанным на появлении феномена набухания капсулы. Техника способа в основном такова. На предметное стекло наносятся три частицы мокроты, затем к каждой из них прибавляется по петле одной из агглютинирующих сывороток (типа I, II и III) и по одной петле синьки Леффлера. Стекло кладется на 10-15 минут во влажную камеру. Затем каждая частица мокроты накрывается покровным стеклом и рассматривается под микроскопом. Набухание капсулы будет происходить только в том препарате, к которому прибавлена сыворотка, агглютинирующая данный тип пневмококка.

б. Пневмобациллы (или диплобациллы Фридлендера) могут также являться возбудителями крупозной пневмонии, ухудшая течение заболевания и прогноз, но иногда
встречаются и при лобулярной пневмонии. Это довольно толстые парные палочки с за-
кругленными концами, заключенные в капсулу, грам-отрицательны.

в. Веретенообразная палочка (Вас. fusiforalis) и спирохета, встречаясь одновременно, считаются возбудителями гангрены легкого. Вас. fusiformis - довольно длинная грам-отрицательная палочка, заостряющаяся по направлению к концам, нередко
с просветом в центральной части. Спирохеты также грам-отрицательны, очень нежны,
форма завитков неправильная, количество их 2-3.

г. Стафилококки и стрептококки нередко находятся в мокроте больных с абсцессом легких, возбудителем которого они в ряде случаев и являются. Они грам-положительны. Нужно иметь в виду, что единичные стрептококки могут встретиться в любой
мокроте.

д. Бациллы инфлуэнцы, катаральный микрококк, micrococcus tetragenes, Вас.
pyocyaneus встречаются реже, нахождение их в мокроте имеет меньшее значение.

з. Окраска туберкулезной палочки. В основу всех методов положено особое свойство туберкулезной палочки, которым обладают, впрочем, также лепрозная палочка и некоторые сапрофиты. Эти бактерии с трудом воспринимают окраску, поэтому требуют применения подогревания и прибавления к анилиновой краске протравляющих веществ. С другой стороны, с трудом однажды окрасившись, они прочно удерживают краску, не обесцвечиваясь от воздействия кислотами и спиртом, т. е. являются кислото- и спиртоустойчивыми. Из многочисленных методов, предложенных для окраски туберкулезных палочек, наиболее распространенным является классический метод Циль-Нильсена (Ziehl-Neelsen). На высушенный и зафиксированный мазок мокроты накладывается аккуратно вырезанная полоска фильтровальной бумаги и наливается карболовый фуксин Циля. Стекло захватывается пинцетом Корнета и подогревается над пламенем спиртовки (держать на высоте около 20 см) до образования паров. Нужно следить, чтобы на препарате при подогревании все время была краска, чтобы бумажка была «сочной»; по мере испарения краску следует подливать, иначе может выпасть осадок, который испортит препарат. После появления паров подогревание прекращается, а бумажка с краской оставляется на 2-3 минуты. Затем бумажка сбрасывается, препарат промывается водой и опускается в стаканчик с 10-15% серной кислотой (можно пользоваться и 10% азотной или 3% соляной кислотой). Вместо того чтобы опускать препарат в кислоту, можно залить его сверху. Приблизительно через минуту препарат вынимается из кислоты и промывается водой. Если при этом он оказывается интенсивно розовым, обесцвечивание недостаточно, и его надо повторить до сохранения препаратом слабо-розового оттенка. Наконец, для дополнительного окрашивания всех элементов, которые обесцветились, на мазок наливается водный раствор метиленовой синьки (1 : 1000) на полминуты. Мазок снова промывается водой и прослушивается. Итак, способ состоит из следующих моментов: 1) окраска в основной цвет всех элементов мазка, 2) обесцвечивание всех их, кроме туберкулезной палочки, и 3) дополнительная окраска. При окраске по Циль-Нильсену, следовательно, туберкулезная палочка окрашивается в красный цвет и находится на голубом фоне.

Вид туберкулезной палочки под микроскопом довольно разнообразен, чаще, однако, это тонкие изящные довольно длинные палочки, прямые или изогнутые, расположенные поодиночке или кучками, иногда под углом друг к другу. Нередко встречаются четкообразные, фрагментированные формы. Количество туберкулезных палочек в мокроте очень разнообразно - от единичных во всем препарате до колоссального насыщения ими, при котором мазок производит впечатление чистой культуры. Подсчет палочек по полям зрения большого значения не имеет, тем более что они распределяются очень неравномерно. Нельзя удовлетворяться отрицательным результатом однократного исследования; в случае малейшего подозрения на туберкулез его надо повторить несколько раз.

Иногда приходится прибегать к методу насыщения препарата после предварительной гомогенизаций мокроты. Существует, правда, взгляд, что тщательное повторное исследование обычного мазка мало в чем уступает таким кропотливым методам. Одним из распространенных способов этого рода является способ обработки антиформином Уленгута (Uhlenhuth). 1 часть мокроты смешивается с 1-2 частями 25% раствора антиформина и сильно взбалтывается, после чего оставляется до полного растворения (гомогенизация). Затем к жидкости прибавляется около одной трети объема дистиллированной воды, и она центрифугируется полчаса. Жидкий слой сливается быстрым опрокидыванием пробирки, причем она остается в таком положении минут 5-10 на подстилке из фильтровальной бумаги - до полного извлечения воды. Из осадка приготовляется мазок, который высушивается, фиксируется и окрашивается по Циль-Нильсену.

Кислотоупорные палочки в мокроте можно считать, несомненно, туберкулезными, но следует все-таки иметь в виду, что очень редко, правда, кислотоупорные палочки могут встретиться в мокроте при отеке, гангрене легкого, бронхэктазиях.

Посев. Во всех подозрительных на туберкулез случаях, где повторное тщательное бактериологическое исследование остается безрезультатным, следует произвести посев мокроты на одну из специальных сред. Рост палочек может продолжаться в течение срока от 7 дней до 3 месяцев.

Кроме туберкулеза, посев мокроты производится и при острых инфекциях с целью выявления возбудителя или более точного выяснения его характера, например при крупозной пневмонии для определения типа пневмококка, что имеет большое значение для оценки случая. Для посева мокрота должна быть собрана в стерильную баночку, которая должна тотчас же после каждого выделения мокроты закрываться. Предварительно больному следует прополоскать рот свежекипяченой водой.

Опыты на животных. В случаях, где клиническая картина вызывает настойчивое подозрение на туберкулез, а ни бактериоскопическое исследование, ни посев не подтверждают диагноза, можно прибегнуть к заражению животного - биологическая проба. Оно оказывается необходимым, кроме того, в случаях, где бактериоскопическое исследование обнаруживает кислотоустойчивые палочки, а оснований подозревать туберкулез нет. Опыт производится на морских свинках.

Приготовление окрашивающих растворов
Карболовый генцианвиолет. 1 г генцианвиолета тщательно растирается в ступке с 5 г кристаллической карболовой кислоты и несколькими каплями чистого глицерина. При постоянном размешивании прибавляется понемногу 10 см3 96° спирта и так же осторожно 100 см3 дистиллированной воды. Краска оставляется в ступке на сутки, после чего фильтруется в соответственный флакон. Хорошо приготовленная окраска образует на поверхности золотистую пленку. Краска нестойка. Признаком ее порчи служит появление на стенках флакона мельчайших крупинок осадка.

Карболовый фуксин Циля приготовляется аналогично генцианвиолету по следующей прописи: фуксина (основного) 1,0, 96° спирта 10 см3, глицерина несколько капель, кристаллической карболовой кислоты 5 г, дистиллированной воды до 100 см3. Раствор очень стоек, может сохраняться долго.

Раствор Люголя. 2 г йодистого калия растворяются в 10 см3 дистиллированной воды, и туда прибавляется 1 г металлического йода. После полного растворения йода добавляется воды до 300 см3.

Страница 2 - 2 из 2
Начало | Пред. | 1 2 | След. | Конец


Еще по теме:


Ваше имя:
Защита от автоматических сообщений:
Защита от автоматических сообщений Символы на картинке: