Методы исследования на описторхоз и другие трематоды
Эффективность выявления яиц описторхисов и других трематод повышается при использовании методов, основанных на осаждении яиц. Таким явился метод Телемана.
Специально для исследования испражнений на яйца описторхисов был предложен метод П. П. Горячева. Этим методом можно выявлять и яйца других гельминтов. В цилиндр диаметром 2,5-3 см и высотой 18-20 см наливают 80-100 мл 20-22% раствора нитрата калия или насыщенного раствора хлорида натрия; 0,5-1 г исследуемого кала тщательно размешивают в 20-25 мл дистиллированной воды, осторожно процеживают в цилиндр через металлическое Сито или марлю, надетые на воронку, избегая смешивания кала и солевого раствора, конец воронки может быть погружен в солевой раствор на 0,25-0,5 см. Вследствие медленной диффузии между солевым раствором и дистиллированной водой со взвешенными в ней частичками кала яйца могут находиться в цилиндре в верхнем слое в течение нескольких часов (яйца оседают на дно цилиндра по мере отстаивания смеси). Через 2-3 ч верхний слой кала из цилиндра отсасывают пипеткой, оставшийся раствор центрифугируют или отстаивают в течение 15-20 ч. Осадок переносят пипеткой на предметное стекло и исследуют под микроскопом. Е. С. Шульман для диагностики описторхоза с успехом использовал в его очагах метод Фюллеборна с длительным отстаиванием: хорошие результаты были получены при исследовании осадка смеси после 7-12 ч ее отстаивания с обязательным микроскопированием в очень тонком большом мазке.
В дальнейшем авторы стали использовать упрощенный способ наслаивания по Горячеву в пробирке, а не в воронке и с использованием насыщенного раствора хлорида натрия, что повысило эффективность выявления больных. Метод Горячева в этой модификации оказался не более сложным, чем метод Фюллeбоpнa.
Несколько усовершенствовали и упростили методику Горячева также Ю. А. Березанцев и Ф. И. Межазакис. Вместо цилиндра была использована делительная воронка вместимостью 50 мл, из которой удобно выпускать осадок с яйцами гельминтов. В воронку наливали 40 мл солевого раствора. Фекалии (1 г) в отдельном стаканчике тщательно размешивали деревянной палочкой с 10 мл воды и осторожно наслаивали сверху через воронку с двумя слоями марли. Спустя 5-6 ч выпускали 30-35 мл солевого раствора с осевшими яйцами в центрифужные пробирки и после центрифугирования микро-скопировали осадок. В дальнейшем авторы для эмульгирования кала вместо воды стали применять 2% уксусную кислоту, а для солевого раствора использовали нитрат натрия. При наслаивании на солевой раствор испражнений, гомогенизированных в уксусной кислоте, последняя вступает в реакцию с раствором нитрата натрия. Реакция идет очень медленно, выделяющийся при этом кислород и двуокись азота образуют мельчайшие пузырьки, поднимающиеся к поверхности. Они задерживаются в слое кала и препятствуют его оседанию. Однако это не влияет на оседание яиц описторхиса. Поэтому в осадке, выпущенном из делительной воронки, находятся практически одни яйца описторхисов без посторонних примесей, что значительно облегчает микроскопирование.
В. Д. Завойкин провел сравнительное изучение ряда методов для диагностики описторхоза. Наилучшие результаты получены ими при использовании метода Аллен и Ридлей.
Оснащение, необходимое при этом методе: центрифуга на 3000 аб/мин, центрифужные пробирки вместимостью около 15 мл, металлическое сито с отверстиями в количестве 15--18 на 1 см (225-300 на 1 см2), фарфоровая чашка вместимостью 30-50 мл, деревянные палочки, вата, реактив- 10% формалин, этиловый эфир.
В центрифужные пробирки наливают по 7 мл 10% раствора формалина. Деревянной палочкой пробу фекалий величиной с горошину опускают в пробирку с формалином и размешивают до образования однородной смеси. Содержимое пробирки процеживают через металлическое сито в фарфоровую чашку. Пробирку ополаскивают водой под краном. Жидкость ив чашки возвращают в пробирку, добавляют к ней 3 мл эфира и пробирку закрывают резиновой пробкой. Содержимое каждой пробирки энергично встряхивают в течение 30 с. Освободившуюся фарфоровую чашку и сито вымывают под сильной струей воды для обработки следующей порции кала. После встряхивания проб фекалий в смеси формалина и эфира пробирки помещают в гнезда центрифуги, резиновые пробки из пробирок вынимают и ополаскивают водой из-под крана. Центрифугирование проводят при скорости 3000 об/мин в течение 1 мин. После центрифугирования в пробирках образуется слой коагулированного белка на границе эфира и формалина. Для его удаления деревянной палочкой проводят по внутренней поверхности пробирки и отделяют образовавшийся плотный слой частиц. Верхний слой надосадочной жидкости вместе с коагулированными частицами осторожно сливают. Если внутренняя поверхность пробирки будет грязной, ее следует обтереть ватным тампоном на палочке. На дне пробирки оставляют одну каплю жидкости над осадком и встряхивают. Жидкость из пробирки помещают на предметное стекло, делают мазок, накрывают покровным стеклом и центрифугируют.
Г. А. Котельников и В. И. Хренов для диагностики фасциолеза рекомендуют метод флотации с раствором нитрата свинца.
Пробу фекалий (3 г) кладут в стаканчик, заливают небольшим количеством раствора нитрата свинца и тщательно размешивают палочкой. При размешивании добавляют раствор порциями до 50 мл. Затем взвесь фильтруют через ситечко в другой стаканчик. Профильтрованную взвесь оставляют стоять 15-20 мин. Прикосновением металлической петли к поверхности взвеси снимают 3-4 капли с разных мест и переносят на предметное стекло для микроскопии. Чтобы не допустить быстрого высыхания и кристаллизации капель на предметных стеклах, в каждой капле, снятой с поверхности взвеси, добавляют каплю глицерина, разведенного пополам с водой. Яйца фасциол в растворе слегка деформируются, приобретают форму полумесяца или овала с тупыми углами, их легко обнаружить благодаря золотистой или коричневой окраске. При добавлении капли дистиллированной воды к препарату форма яиц восстанавливается.
Раствор нитрата свинца плотностью 1,5 готовят из расчета 650 г на 1 л воды. Соль растворяют в горячей воде в эмалированном ведре при постоянном размешивании и подогревании. Фильтрация не обязательна.
Специально для исследования испражнений на яйца описторхисов был предложен метод П. П. Горячева. Этим методом можно выявлять и яйца других гельминтов. В цилиндр диаметром 2,5-3 см и высотой 18-20 см наливают 80-100 мл 20-22% раствора нитрата калия или насыщенного раствора хлорида натрия; 0,5-1 г исследуемого кала тщательно размешивают в 20-25 мл дистиллированной воды, осторожно процеживают в цилиндр через металлическое Сито или марлю, надетые на воронку, избегая смешивания кала и солевого раствора, конец воронки может быть погружен в солевой раствор на 0,25-0,5 см. Вследствие медленной диффузии между солевым раствором и дистиллированной водой со взвешенными в ней частичками кала яйца могут находиться в цилиндре в верхнем слое в течение нескольких часов (яйца оседают на дно цилиндра по мере отстаивания смеси). Через 2-3 ч верхний слой кала из цилиндра отсасывают пипеткой, оставшийся раствор центрифугируют или отстаивают в течение 15-20 ч. Осадок переносят пипеткой на предметное стекло и исследуют под микроскопом. Е. С. Шульман для диагностики описторхоза с успехом использовал в его очагах метод Фюллеборна с длительным отстаиванием: хорошие результаты были получены при исследовании осадка смеси после 7-12 ч ее отстаивания с обязательным микроскопированием в очень тонком большом мазке.
В дальнейшем авторы стали использовать упрощенный способ наслаивания по Горячеву в пробирке, а не в воронке и с использованием насыщенного раствора хлорида натрия, что повысило эффективность выявления больных. Метод Горячева в этой модификации оказался не более сложным, чем метод Фюллeбоpнa.
Несколько усовершенствовали и упростили методику Горячева также Ю. А. Березанцев и Ф. И. Межазакис. Вместо цилиндра была использована делительная воронка вместимостью 50 мл, из которой удобно выпускать осадок с яйцами гельминтов. В воронку наливали 40 мл солевого раствора. Фекалии (1 г) в отдельном стаканчике тщательно размешивали деревянной палочкой с 10 мл воды и осторожно наслаивали сверху через воронку с двумя слоями марли. Спустя 5-6 ч выпускали 30-35 мл солевого раствора с осевшими яйцами в центрифужные пробирки и после центрифугирования микро-скопировали осадок. В дальнейшем авторы для эмульгирования кала вместо воды стали применять 2% уксусную кислоту, а для солевого раствора использовали нитрат натрия. При наслаивании на солевой раствор испражнений, гомогенизированных в уксусной кислоте, последняя вступает в реакцию с раствором нитрата натрия. Реакция идет очень медленно, выделяющийся при этом кислород и двуокись азота образуют мельчайшие пузырьки, поднимающиеся к поверхности. Они задерживаются в слое кала и препятствуют его оседанию. Однако это не влияет на оседание яиц описторхиса. Поэтому в осадке, выпущенном из делительной воронки, находятся практически одни яйца описторхисов без посторонних примесей, что значительно облегчает микроскопирование.
В. Д. Завойкин провел сравнительное изучение ряда методов для диагностики описторхоза. Наилучшие результаты получены ими при использовании метода Аллен и Ридлей.
Оснащение, необходимое при этом методе: центрифуга на 3000 аб/мин, центрифужные пробирки вместимостью около 15 мл, металлическое сито с отверстиями в количестве 15--18 на 1 см (225-300 на 1 см2), фарфоровая чашка вместимостью 30-50 мл, деревянные палочки, вата, реактив- 10% формалин, этиловый эфир.
В центрифужные пробирки наливают по 7 мл 10% раствора формалина. Деревянной палочкой пробу фекалий величиной с горошину опускают в пробирку с формалином и размешивают до образования однородной смеси. Содержимое пробирки процеживают через металлическое сито в фарфоровую чашку. Пробирку ополаскивают водой под краном. Жидкость ив чашки возвращают в пробирку, добавляют к ней 3 мл эфира и пробирку закрывают резиновой пробкой. Содержимое каждой пробирки энергично встряхивают в течение 30 с. Освободившуюся фарфоровую чашку и сито вымывают под сильной струей воды для обработки следующей порции кала. После встряхивания проб фекалий в смеси формалина и эфира пробирки помещают в гнезда центрифуги, резиновые пробки из пробирок вынимают и ополаскивают водой из-под крана. Центрифугирование проводят при скорости 3000 об/мин в течение 1 мин. После центрифугирования в пробирках образуется слой коагулированного белка на границе эфира и формалина. Для его удаления деревянной палочкой проводят по внутренней поверхности пробирки и отделяют образовавшийся плотный слой частиц. Верхний слой надосадочной жидкости вместе с коагулированными частицами осторожно сливают. Если внутренняя поверхность пробирки будет грязной, ее следует обтереть ватным тампоном на палочке. На дне пробирки оставляют одну каплю жидкости над осадком и встряхивают. Жидкость из пробирки помещают на предметное стекло, делают мазок, накрывают покровным стеклом и центрифугируют.
Г. А. Котельников и В. И. Хренов для диагностики фасциолеза рекомендуют метод флотации с раствором нитрата свинца.
Пробу фекалий (3 г) кладут в стаканчик, заливают небольшим количеством раствора нитрата свинца и тщательно размешивают палочкой. При размешивании добавляют раствор порциями до 50 мл. Затем взвесь фильтруют через ситечко в другой стаканчик. Профильтрованную взвесь оставляют стоять 15-20 мин. Прикосновением металлической петли к поверхности взвеси снимают 3-4 капли с разных мест и переносят на предметное стекло для микроскопии. Чтобы не допустить быстрого высыхания и кристаллизации капель на предметных стеклах, в каждой капле, снятой с поверхности взвеси, добавляют каплю глицерина, разведенного пополам с водой. Яйца фасциол в растворе слегка деформируются, приобретают форму полумесяца или овала с тупыми углами, их легко обнаружить благодаря золотистой или коричневой окраске. При добавлении капли дистиллированной воды к препарату форма яиц восстанавливается.
Раствор нитрата свинца плотностью 1,5 готовят из расчета 650 г на 1 л воды. Соль растворяют в горячей воде в эмалированном ведре при постоянном размешивании и подогревании. Фильтрация не обязательна.