Методы определения иммунных комплексов
Возможны разные подходы к оценке реакций иммунных комплексов:
- выявление антител при помощи радиоиммунного или иммуноферментного анализов и т. д., это, однако, не доказывает, что соответствующие реакции являются патогенетически значимыми;
II - выявление иммунных комплексов или индуцированной ими активации комплемента;
III - аппликация антигена вызывает характерную реакцию Артюса через 6-8 ч.
Методы выявления иммунных комплексов. Иммунные комплексы могут быть выявлены в плазме крови, других тканевых жидкостях и тканях прямыми методами с помощью микроскопии. Обнаружение отложений иммуноглобулинов с помощью иммунофлюоресценции или иммуноферментного метода является диагностически важным. Присутствующие в иммунных комплексах антитела или вторично связанные компоненты комплемента (СЗ) идентифицируются мечеными антисыворотками. К такому подходу в последнее время добавилась группа методов, позволяющих определять циркулирующие иммунные комплексы. В принципе иммунные комплексы могут быть идентифицированы за счет их физических или биологических свойств. Изменение размеров может быть использовано как критерий для разделения в градиенте плотности и фильтрации, а также препаративного или аналитического ультрацентрифугирования. Полученные данные позволяют идентифицировать эти высокомолекулярные фракции в качестве иммунных комплексов. В целом эти методы больше пригодны для научных исследований, чем для общепринятого лабораторного анализа, хотя с их помощью были получены интересные результаты, например, при ревматоидном артрите или проказе.
Изменение растворимости. Образование иммунных комплексов сопровождается также уменьшением их растворимости. И при этом методе необходимо проводить идентификацию иммунных комплексов среди соединений со сниженной растворимостью. Это следует учитывать при использовании метода, основанного на особых свойствах полиэтиленгликоля (ПЭГ), данный тест в силу своей простоты находит все большее распространение. С помощью ПЭГ при его концентрации 2,5-4% можно осуществлять разделительную преципитацию. Большие белковые молекулы, например, иммунный комплекс, выпадают в осадок, а несвязанные антитела, альбумин и т. д. остаются в растворе. Чем больше белковая молекула, тем меньше концентрация ПЭГ, необходимая для образования осадка. За счет влияния неспецифических эффектов часто могут получаться ложноположительные или ложноотрицательные результаты, что значительно сокращает значимость теста. Он был переработан в стандартный скрининг-метод. Реакция преципитации возможна в том случае, если доказано, что в комплексе присутствуют Clq или С4 (методы диссоциации и радиальной иммунодиффузии) либо IgG (связывание белка стафилококка группы А).
Обнаружение иммунных комплексов на основе их биологических свойств. Иммунные комплексы несут структуры, способные специфическим образом реагировать со свободными молекулами или рецепторами на клетках.
Взаимодействие с комплементом. В принципе разработаны следующие подходы к оценке этой реакции:
- методы, непосредственно основанные на фиксации Clq;
- конкурентные методы взаимодействия комплекса антиген-антитело с гемолитическим активным комплементом или с Clq-компонентом.
Основную трудность составляет отделение других веществ (например, продуктов обмена веществ микроорганизмов).
Наиболее известен метод определения «антикомплементарной активности». Неспецифическая активация комплемента может привести к ложноположительным результатам. Аналогичным образом может быть использован Clq (конкуренция иммунных комплексов, с сенсибилизированными эритроцитами за связь с Clq, меченным изотопом, определение радиоактивности сепарированных эритроцитов). Этот метод более чувствителен, чем определение общей антикомплементарной активности, неспецифическая активация комплемента на него не действует. На результаты в данном случае могут влиять ДНК и определенные бактериальные вещества, так как и они могут связывать Clq. Вместо сенсибилизированных эритроцитов можно использовать частицы латекса, нагруженные IgG. По другой модификации метода оценивается торможение агглютинации частиц латекса, несущих иммуноглобулины, Clq (возможность выделения ревматоидного фактора).
Для непосредственного определения фиксации иммунных комплексов на Clq наиболее простым, но наименее чувствительным методом является преципитация с Clq в агарозе. Исследуемые жидкости, содержащие соответственно Clq и иммунные комплексы, диффундируют по направлению друг к другу и образуют преципитационную линию.
ДНК и другие полианионы могут быть помехами в данном тесте. Метод фиксации Clq более чувствителен. Сыворотку или другую физиологическую жидкость организма инкубируют с радиоактивно меченным Clq, а затем определяют связанный с ПЭГ Clq путем разделительной преципитации. Чем выше концентрация иммунных комплексов, тем больше Clq обнаруживается в преципитате. Неспецифические эффекты могут быть снижены при действии ЭДТА. По другой модификации Clq фиксируется на поверхности полистирола. Чем выше уровень иммунных комплексов в пробе, тем больше связывается с молекулами Clq. Их количество определяется при последующем соединении с антииммуноглобулином, несущим радиоактивную или ферментную метку.
Реакция с антииммуноглобулином. Ревматоидный фактор (РФ) является антителом к IgG, реагирующим с определенными структурами Fc-участка, которые имеются в большом количестве в иммунных комплексах или агрегатах IgG. Более подходящими, чем поликлональные пРФ, обнаруженные при ревматоидном артрите, являются моноклональные мРФ, присутствующие в отдельных плазмоцитомах в виде парапротеина. Могут быть использованы и иммунные сыворотки животных с аналогичной специфичностью. Наиболее прост, но и наименее чувствителен тест преципитации в агаре с добавлением антииммуноглобулина. Большую ценность представляет радиоактивный анализ, например, для идентификации моноклонального РФ, фиксированного на микрокристаллической целлюлозе. Иммунные комплексы обнаруживают вследствие их связывания с мечеными агрегированными иммуноглобулинами.
Аналогичным образом можно определять связанный меченый агрегат иммуноглобулинов по его комплексу с сывороткой, содержащей РФ. Можно использовать ингибирующее действие иммунных комплексов, связывая меченый (моноклональный) РФ с сефарозой, нагруженной иммуноглобулинами, или вызывая агглютинацию нагруженных Fq-частиц латекса с РФ.
Недостаток этих методов состоит в неточности данных при заболеваниях, связанных с наличием РФ; свободные иммуноглобулины, способные образовывать связь с указанными частицами латекса, могут искажать результаты, поэтому проба должна быть предварительно инактивирована (возможно образование неспецифических агрегатов). Дальнейшие исследования должны показать, вызывает ли использование антиантител повышение специфичности, так как в отличие от РФ они реагируют только с антителами иммунного комплекса и не вступают во взаимодействие с агрегатами иммуноглобулинов.
Реакция с конииммуноконглютининами. Конглютинины отличаются способностью реагировать к компонентам комплемента, особенно к СЗ. При определенной постановке реакции их можно использовать для выявления ИК, связывающих комплемент. Конглютинин в основном фиксируется на поверхности клетки, а связанные ИК, содержащие комплемент, обнаруживают при помощи меченой aHTH-Ig-сыворотки. Недостаток этого метода заключается в том, что определенное количество IgG остается несвязанным. Аналогичным образом может быть использован тест с антителами в твердофазном анализе.
Реакция с клеточными рецепторами. Особый интерес представляет анализ взаимодействия иммунных комплексов и клеток, так как он позволяет широко осветить патогенетические механизмы. К сожалению, данные реакции сильно варьируют, что осложняет их стандартизацию.
Связь с FcR. Данные рецепторы есть у целого ряда клеток. Они связывают агрегированные Ig или иммунные комплексы, хотя несвязанные антитела в зависимости от их концентрации также могут оказывать определенное влияние на ход реакции. Для объективной оценки результатов используют непрямые биологические тесты. Способы реализации функциональной способности клетки могут быть различными.
В тесте агрегации тромбоцитов проводится микроскопическая оценка агрегатов свежевыделенных тромбоцитов. Определяется то максимальное разведение, при котором наблюдают выраженную агглютинацию. Более чувствителен тест определения высвобождаемых медиаторов (например, 3Н-серотонина). Ложноположительные данные могут быть получены из-за участия в реакции антител к тромбоцитам, макромолекул с большим зарядом, протеолитических ферментов и определенных микоплазм; ложноотрицательные результаты дает РФ, связанный с IgM.
Иммунные комплексы, присоединяясь к FcR, блокируют АЗКЦ. Аналогичным образом они воздействуют на образование ЕА-розеток. Эти свойства также используются для обнаружения иммунных комплексов. В первую очередь определяют иммунные комплексы, содержащие IgG либо только фрагменты комплемента от С1 до С4. Комплексы с СЗ дают значительно более слабый эффект, подавляют ЕАС-розеткообразование.
Оценка торможения фагоцитоза иммунными комплексами также используется для их определения. Клетки (макрофаги морской свинки) инкубируют с мечеными агрегатами Ig, а затем учитывают радиоактивность отмытых макрофагов.
Связь с рецепторами комплемента. Некоторые культуры лимфоцитов человека имеют особенно много рецепторов к СЗb и C3d. Наиболее известна культура клеток Raji, которую изучают с помощью радиоиммунного анализа. Raji - это лимфобласты В-клеточной лимфомы. Наряду с С-рецепторами они несут рецепторы к Fc-фрагменту, что приводит в некоторых случаях к искажению результатов (если. предварительно FcR соответствующим образом не блокируют). Другой причиной ошибок могут быть антилимфоцитарные антитела. Исследуемую пробу инкубируют с клетками, которые затем отмывают и добавляют к ним aHTH-Ig-сыворотку. После этого смесь центрифугируют. Чем выше концентрация иммунных комплексов в пробе, тем больше их связывается и соответственно выше радиоактивность связанных клеток. Аналогичным образом может быть использована антисыворотка с флюоресцентными маркерами.
Целесообразно также применять тест на подавление ЕАС-розеткообразования. Ингибиция образования розеток в данном случае обусловлена компонентами комплемента в составе иммунного комплекса и растворимыми продуктами активированной С-системы.
Многообразие методов выявления иммунных комплексов и отчасти полученные противоречивые результаты ограничивают интерпретацию данных. Необходимо учитывать следующее; - исследуемые пробы представляют собой, как правило, смесь иммунных комплексов, компоненты которой по-разному определяются в зависимости от метода. Даже анализ фракционированных термоаггрегированных Fg свидетельствует об особенностях связывания с Clq или RF. Для взаимодействия с рецепторами комплемента или конглютинина необходимо не только связывание соответствующего компонента, но и его активация. Для выявления комплемент содержащих комплексов при условии избытка антител больше подходят конглютининовый тест и Raji-тест. В случае избытка антигена более рациональным является тест, основанный на связывании Clq или моноклонального
- иммунные комплексы образуются за счет валентных связей и испытывают определенные изменения под действием комплемента и клеток;
- иммунные комплексы плазмы и других биологических жидкостей не вполне отражают выраженность патологического процесса.
Не удивительно поэтому, что циркулирующие иммунные комплексы могут быть выявлены даже при отсутствии признаков воспаления, тогда как ИК-индуцированные проявления не сопровождаются положительной реакцией на циркулирующие иммунные агрегаты.
Следующая проблема связана с оптимизацией метода. Дело в том, что стандартизация метода осуществляется, как правило, с помощью термоагрегированного Ig, тогда как природные иммунные комплексы характеризуются выраженной гетерогенностью; подготовка образцов (замораживание и размораживание при хранении, инактивация комплемента) приводит к частичной агрегации сывороточных Ig.
Наиболее чувствительные методы позволяют выявить 5- 10 мкг/мл агрегированных Ig. Диагностически значимыми являются тесты с использованием Clq- и Raji-техники.
Антигенспецифические методы. Все приведенные выше методы позволяют определять иммунные комплексы, однако не дают данных о характере участвующих антигенов. Эти сведения можно получить после диссоциации иммунных комплексов (например, по снижению рН). Таким образом были идентифицированы гемоглобин, ДНК и инсулин. Другим тестом может служить радиоиммунная преципитация с ПЭГ. ПЭГ-преципитат инкубируют с радиоактивно меченной антисывороткой, а затем снова добавляют ПЭГ. Если в иммунном комплексе присутствовал антиген, то сыворотка присоединяется к соответствующей свободной валентности. Аналогичным образом может быть использован меченый антиген, образующий связь со свободной валентностью антитела. Определенную диагностическую ценность имеет метод SDS-PAGE в сочетании с иммуноблотингом.
Активация комплемента. Косвенные серологические данные указывают на способность клеток к активации комплемента. Однако интенсивный синтез приводит только при обширных реакциях к снижению концентраций отдельных компонентов (СЗ, С4). Более информативным методом является определение повышенной концентрации продуктов распада, например C3d. Низкомолекулярные фрагменты путем дифференциальной преципитации отделяют от высокомолекулярных (22% ПЭГ) и выявляют в супернатанте с помощью антисывороток. Более простым, хотя и полуколичественным методом является электрофорез по Laurell. В зоне СЗ расположены и другие пики преципитации, содержащие низкомолекулярные компоненты, которые имеют антигенные детерминанты нативного СЗ. Однако этот тест обусловлен лишь неспецифической активацией комплемента, была обнаружена определенная взаимосвязь, например, между наличием продуктов Clq расщепления СЗ и способностью связывать Clq.
Читать далее Клиническое значение иммунных комплексов
- выявление антител при помощи радиоиммунного или иммуноферментного анализов и т. д., это, однако, не доказывает, что соответствующие реакции являются патогенетически значимыми;
II - выявление иммунных комплексов или индуцированной ими активации комплемента;
III - аппликация антигена вызывает характерную реакцию Артюса через 6-8 ч.
Методы выявления иммунных комплексов. Иммунные комплексы могут быть выявлены в плазме крови, других тканевых жидкостях и тканях прямыми методами с помощью микроскопии. Обнаружение отложений иммуноглобулинов с помощью иммунофлюоресценции или иммуноферментного метода является диагностически важным. Присутствующие в иммунных комплексах антитела или вторично связанные компоненты комплемента (СЗ) идентифицируются мечеными антисыворотками. К такому подходу в последнее время добавилась группа методов, позволяющих определять циркулирующие иммунные комплексы. В принципе иммунные комплексы могут быть идентифицированы за счет их физических или биологических свойств. Изменение размеров может быть использовано как критерий для разделения в градиенте плотности и фильтрации, а также препаративного или аналитического ультрацентрифугирования. Полученные данные позволяют идентифицировать эти высокомолекулярные фракции в качестве иммунных комплексов. В целом эти методы больше пригодны для научных исследований, чем для общепринятого лабораторного анализа, хотя с их помощью были получены интересные результаты, например, при ревматоидном артрите или проказе.
Изменение растворимости. Образование иммунных комплексов сопровождается также уменьшением их растворимости. И при этом методе необходимо проводить идентификацию иммунных комплексов среди соединений со сниженной растворимостью. Это следует учитывать при использовании метода, основанного на особых свойствах полиэтиленгликоля (ПЭГ), данный тест в силу своей простоты находит все большее распространение. С помощью ПЭГ при его концентрации 2,5-4% можно осуществлять разделительную преципитацию. Большие белковые молекулы, например, иммунный комплекс, выпадают в осадок, а несвязанные антитела, альбумин и т. д. остаются в растворе. Чем больше белковая молекула, тем меньше концентрация ПЭГ, необходимая для образования осадка. За счет влияния неспецифических эффектов часто могут получаться ложноположительные или ложноотрицательные результаты, что значительно сокращает значимость теста. Он был переработан в стандартный скрининг-метод. Реакция преципитации возможна в том случае, если доказано, что в комплексе присутствуют Clq или С4 (методы диссоциации и радиальной иммунодиффузии) либо IgG (связывание белка стафилококка группы А).
Обнаружение иммунных комплексов на основе их биологических свойств. Иммунные комплексы несут структуры, способные специфическим образом реагировать со свободными молекулами или рецепторами на клетках.
Взаимодействие с комплементом. В принципе разработаны следующие подходы к оценке этой реакции:
- методы, непосредственно основанные на фиксации Clq;
- конкурентные методы взаимодействия комплекса антиген-антитело с гемолитическим активным комплементом или с Clq-компонентом.
Основную трудность составляет отделение других веществ (например, продуктов обмена веществ микроорганизмов).
Наиболее известен метод определения «антикомплементарной активности». Неспецифическая активация комплемента может привести к ложноположительным результатам. Аналогичным образом может быть использован Clq (конкуренция иммунных комплексов, с сенсибилизированными эритроцитами за связь с Clq, меченным изотопом, определение радиоактивности сепарированных эритроцитов). Этот метод более чувствителен, чем определение общей антикомплементарной активности, неспецифическая активация комплемента на него не действует. На результаты в данном случае могут влиять ДНК и определенные бактериальные вещества, так как и они могут связывать Clq. Вместо сенсибилизированных эритроцитов можно использовать частицы латекса, нагруженные IgG. По другой модификации метода оценивается торможение агглютинации частиц латекса, несущих иммуноглобулины, Clq (возможность выделения ревматоидного фактора).
Для непосредственного определения фиксации иммунных комплексов на Clq наиболее простым, но наименее чувствительным методом является преципитация с Clq в агарозе. Исследуемые жидкости, содержащие соответственно Clq и иммунные комплексы, диффундируют по направлению друг к другу и образуют преципитационную линию.
ДНК и другие полианионы могут быть помехами в данном тесте. Метод фиксации Clq более чувствителен. Сыворотку или другую физиологическую жидкость организма инкубируют с радиоактивно меченным Clq, а затем определяют связанный с ПЭГ Clq путем разделительной преципитации. Чем выше концентрация иммунных комплексов, тем больше Clq обнаруживается в преципитате. Неспецифические эффекты могут быть снижены при действии ЭДТА. По другой модификации Clq фиксируется на поверхности полистирола. Чем выше уровень иммунных комплексов в пробе, тем больше связывается с молекулами Clq. Их количество определяется при последующем соединении с антииммуноглобулином, несущим радиоактивную или ферментную метку.
Реакция с антииммуноглобулином. Ревматоидный фактор (РФ) является антителом к IgG, реагирующим с определенными структурами Fc-участка, которые имеются в большом количестве в иммунных комплексах или агрегатах IgG. Более подходящими, чем поликлональные пРФ, обнаруженные при ревматоидном артрите, являются моноклональные мРФ, присутствующие в отдельных плазмоцитомах в виде парапротеина. Могут быть использованы и иммунные сыворотки животных с аналогичной специфичностью. Наиболее прост, но и наименее чувствителен тест преципитации в агаре с добавлением антииммуноглобулина. Большую ценность представляет радиоактивный анализ, например, для идентификации моноклонального РФ, фиксированного на микрокристаллической целлюлозе. Иммунные комплексы обнаруживают вследствие их связывания с мечеными агрегированными иммуноглобулинами.
Аналогичным образом можно определять связанный меченый агрегат иммуноглобулинов по его комплексу с сывороткой, содержащей РФ. Можно использовать ингибирующее действие иммунных комплексов, связывая меченый (моноклональный) РФ с сефарозой, нагруженной иммуноглобулинами, или вызывая агглютинацию нагруженных Fq-частиц латекса с РФ.
Недостаток этих методов состоит в неточности данных при заболеваниях, связанных с наличием РФ; свободные иммуноглобулины, способные образовывать связь с указанными частицами латекса, могут искажать результаты, поэтому проба должна быть предварительно инактивирована (возможно образование неспецифических агрегатов). Дальнейшие исследования должны показать, вызывает ли использование антиантител повышение специфичности, так как в отличие от РФ они реагируют только с антителами иммунного комплекса и не вступают во взаимодействие с агрегатами иммуноглобулинов.
Реакция с конииммуноконглютининами. Конглютинины отличаются способностью реагировать к компонентам комплемента, особенно к СЗ. При определенной постановке реакции их можно использовать для выявления ИК, связывающих комплемент. Конглютинин в основном фиксируется на поверхности клетки, а связанные ИК, содержащие комплемент, обнаруживают при помощи меченой aHTH-Ig-сыворотки. Недостаток этого метода заключается в том, что определенное количество IgG остается несвязанным. Аналогичным образом может быть использован тест с антителами в твердофазном анализе.
Реакция с клеточными рецепторами. Особый интерес представляет анализ взаимодействия иммунных комплексов и клеток, так как он позволяет широко осветить патогенетические механизмы. К сожалению, данные реакции сильно варьируют, что осложняет их стандартизацию.
Связь с FcR. Данные рецепторы есть у целого ряда клеток. Они связывают агрегированные Ig или иммунные комплексы, хотя несвязанные антитела в зависимости от их концентрации также могут оказывать определенное влияние на ход реакции. Для объективной оценки результатов используют непрямые биологические тесты. Способы реализации функциональной способности клетки могут быть различными.
В тесте агрегации тромбоцитов проводится микроскопическая оценка агрегатов свежевыделенных тромбоцитов. Определяется то максимальное разведение, при котором наблюдают выраженную агглютинацию. Более чувствителен тест определения высвобождаемых медиаторов (например, 3Н-серотонина). Ложноположительные данные могут быть получены из-за участия в реакции антител к тромбоцитам, макромолекул с большим зарядом, протеолитических ферментов и определенных микоплазм; ложноотрицательные результаты дает РФ, связанный с IgM.
Иммунные комплексы, присоединяясь к FcR, блокируют АЗКЦ. Аналогичным образом они воздействуют на образование ЕА-розеток. Эти свойства также используются для обнаружения иммунных комплексов. В первую очередь определяют иммунные комплексы, содержащие IgG либо только фрагменты комплемента от С1 до С4. Комплексы с СЗ дают значительно более слабый эффект, подавляют ЕАС-розеткообразование.
Оценка торможения фагоцитоза иммунными комплексами также используется для их определения. Клетки (макрофаги морской свинки) инкубируют с мечеными агрегатами Ig, а затем учитывают радиоактивность отмытых макрофагов.
Связь с рецепторами комплемента. Некоторые культуры лимфоцитов человека имеют особенно много рецепторов к СЗb и C3d. Наиболее известна культура клеток Raji, которую изучают с помощью радиоиммунного анализа. Raji - это лимфобласты В-клеточной лимфомы. Наряду с С-рецепторами они несут рецепторы к Fc-фрагменту, что приводит в некоторых случаях к искажению результатов (если. предварительно FcR соответствующим образом не блокируют). Другой причиной ошибок могут быть антилимфоцитарные антитела. Исследуемую пробу инкубируют с клетками, которые затем отмывают и добавляют к ним aHTH-Ig-сыворотку. После этого смесь центрифугируют. Чем выше концентрация иммунных комплексов в пробе, тем больше их связывается и соответственно выше радиоактивность связанных клеток. Аналогичным образом может быть использована антисыворотка с флюоресцентными маркерами.
Целесообразно также применять тест на подавление ЕАС-розеткообразования. Ингибиция образования розеток в данном случае обусловлена компонентами комплемента в составе иммунного комплекса и растворимыми продуктами активированной С-системы.
Многообразие методов выявления иммунных комплексов и отчасти полученные противоречивые результаты ограничивают интерпретацию данных. Необходимо учитывать следующее; - исследуемые пробы представляют собой, как правило, смесь иммунных комплексов, компоненты которой по-разному определяются в зависимости от метода. Даже анализ фракционированных термоаггрегированных Fg свидетельствует об особенностях связывания с Clq или RF. Для взаимодействия с рецепторами комплемента или конглютинина необходимо не только связывание соответствующего компонента, но и его активация. Для выявления комплемент содержащих комплексов при условии избытка антител больше подходят конглютининовый тест и Raji-тест. В случае избытка антигена более рациональным является тест, основанный на связывании Clq или моноклонального
- иммунные комплексы образуются за счет валентных связей и испытывают определенные изменения под действием комплемента и клеток;
- иммунные комплексы плазмы и других биологических жидкостей не вполне отражают выраженность патологического процесса.
Не удивительно поэтому, что циркулирующие иммунные комплексы могут быть выявлены даже при отсутствии признаков воспаления, тогда как ИК-индуцированные проявления не сопровождаются положительной реакцией на циркулирующие иммунные агрегаты.
Следующая проблема связана с оптимизацией метода. Дело в том, что стандартизация метода осуществляется, как правило, с помощью термоагрегированного Ig, тогда как природные иммунные комплексы характеризуются выраженной гетерогенностью; подготовка образцов (замораживание и размораживание при хранении, инактивация комплемента) приводит к частичной агрегации сывороточных Ig.
Наиболее чувствительные методы позволяют выявить 5- 10 мкг/мл агрегированных Ig. Диагностически значимыми являются тесты с использованием Clq- и Raji-техники.
Антигенспецифические методы. Все приведенные выше методы позволяют определять иммунные комплексы, однако не дают данных о характере участвующих антигенов. Эти сведения можно получить после диссоциации иммунных комплексов (например, по снижению рН). Таким образом были идентифицированы гемоглобин, ДНК и инсулин. Другим тестом может служить радиоиммунная преципитация с ПЭГ. ПЭГ-преципитат инкубируют с радиоактивно меченной антисывороткой, а затем снова добавляют ПЭГ. Если в иммунном комплексе присутствовал антиген, то сыворотка присоединяется к соответствующей свободной валентности. Аналогичным образом может быть использован меченый антиген, образующий связь со свободной валентностью антитела. Определенную диагностическую ценность имеет метод SDS-PAGE в сочетании с иммуноблотингом.
Активация комплемента. Косвенные серологические данные указывают на способность клеток к активации комплемента. Однако интенсивный синтез приводит только при обширных реакциях к снижению концентраций отдельных компонентов (СЗ, С4). Более информативным методом является определение повышенной концентрации продуктов распада, например C3d. Низкомолекулярные фрагменты путем дифференциальной преципитации отделяют от высокомолекулярных (22% ПЭГ) и выявляют в супернатанте с помощью антисывороток. Более простым, хотя и полуколичественным методом является электрофорез по Laurell. В зоне СЗ расположены и другие пики преципитации, содержащие низкомолекулярные компоненты, которые имеют антигенные детерминанты нативного СЗ. Однако этот тест обусловлен лишь неспецифической активацией комплемента, была обнаружена определенная взаимосвязь, например, между наличием продуктов Clq расщепления СЗ и способностью связывать Clq.
Читать далее Клиническое значение иммунных комплексов