Гриппозная вакцина


Общеизвестно большое социально-экономическое значение гриппа, который, периодически распространяясь по странам и континентам земного шара, в сравнительно сжатые сроки поражает миллионы людей, нанося не только вред здоровью населения, но и существенный экономический ущерб. Неудивительно, что поиск эффективных вакцин для специфической профилактики гриппа и разработка рациональной системы их применения являются одной из наиболее актуальных задач медицинской науки и практики здравоохранения. Если к тому же учесть способность вируса гриппа изменять свою антигенную структуру, вероятнее всего под влиянием формирующегося после очередных эпидемий иммунитета населения или, как говорят вирусологи, осуществлять антигенный дрейф путем смены одного, а то и двух поверхностных антигенов (гемагглютинина и нейраминидазы), то становится понятным, почему в нашей стране применяется несколько живых и убитых гриппозных вакцин. Наличие ряда вакцинных препаратов создает условия для более гибкой тактики иммунопрофилактики гриппа в преддверии ожидаемых эпидемий.

Живые гриппозные вакцины издавна широко применяются в нашей стране. В настоящее время используются две живые вакцины, технология производства и способы применения которых различаются.

Живая гриппозная аллантоисная вакцина служит для иммунопрофилактики взрослых в возрасте старше 16 лет и готовится из аттенуированных штаммов вируса типа А или В. Степень аттенуации, достигаемой путем пассажей вируса на куриных эмбрионах, полноценность его антигенной структуры, биологическая активность, безвредность, а также реактогенность и иммуногенность для человека регламентированы специальной инструкцией по подготовке вакцинных штаммов. Только при условии соответствия перечисленных свойств аттенуированного штамма требованиям этой инструкции он используется для производства вакцины.

Из специальных хозяйств получают партию куриных эмбрионов 10-11-дневного возраста, обжигают поверхность яиц спиртом, обрабатывают йодом и заражают 1000 заранее оттитрованных эмбриональных инфекционных доз вакцинного штамма. Такую дозу в объеме 0,1 мл вводят шприцем в аллантоисную полость, затем яйца инкубируют в течение 48-72 ч при 33-35°С, с помощью овоскопии отбирают жизнеспособные эмбрионы, охлаждают при 4°С в течение 18-24 ч, после чего, соблюдая условия стерильности, отсасывают вируссодержащую аллантоисную жидкость. Затем ее стабилизируют путем добавления равного объема 10% раствора пептона, вводят в качестве консерванта антибиотики (неомицин и микостатин - соответственно 500 и 200 ед. на 1 мл) и разливают в ампулы. После лиофилизации высушенную вакцину контролируют на:

-стерильность (недопустимо наличие посторонних микроорганизмов);

- биологическую активность;

- безвредность ;

- специфичность;

- физические свойства (таблетка должна иметь вид пористой массы с желтоватым оттенком, легко и полностью растворяться, а остаточная влажность не должна быть выше 3%);

- реактогенность и иммуногенность для людей.

Таким образом, эта вакцина не подвергается специальным процедурам очистки и концентрации, что во многом определяется способом ее применения.
 
Перед использованием таблетку растворяют в указанном в инструкции объеме дистиллированной или кипяченой воды, охлажденной до комнатной температуры. Применяется вакцина троекратно с интервалом 2- 3 недели интраназальным путем с помощью специального распылителя; введение ее с помощью иных приспособлений (пипеток и т. п.) зачастую снижает эффективность прививок.

Разовая прививочная доза содержится в 0,5 мл растворенного препарата. Так как препарат выпускается в виде двух моновакцин типа А и В, то при необходимости одновременной иммунизации против гриппа А и В прививаемому вводят по 0,25 мл вакцины каждого типа, не превышая ранее указанной величины объема разовой прививочной дозы.

Срок годности вакцины при условии соблюдения режимов ее правильной транспортировки и хранения в сухом темном месте при 2-4° равен 1 году.

Живая гриппозная тканевая вакцина в отличие от ранее описанной живой аллантоисной вакцины служит для иммунопрофилактики гриппа как взрослых, так и детей в возрасте старше 1 года. Эта вакцина применяется энтерально - через рот, что несколько упрощает проведение массовых прививок.

Принципы технологии получения этой вакцины следующие. С соблюдением условий стерильности получают почки 19-дневных куриных эмбрионов; измельченную с помощью вакуума почечную ткань взвешивают в специальной среде № 199, содержащей 2% сыворотки крови крупного рогатого скота, в случае инокуляции вирусом типа В и заражают аттенуированным вакцинным штаммом вируса типа А или В, свойства которого отвечают ранее перечисленным требованиям специальной инструкции. Затем сосуды с суспензией зараженных клеток помещают в роллерную установку, где они вращаются со скоростью 4-6 об/мин. После инкубирования вируссодержащую жидкость собирают, стабилизируют добавлением сорбита и желатина до концентрации соответственно 5 и 2,5%, разливают во флаконы и лиофилизируют. После этого препарат контролируют на:

- стерильность;

- физические свойства;

- безвредность;

- полноценность антигенной структуры;

- биологическую активность;

- реактогенность и иммуногенность для людей.

Если результаты контроля соответствуют перечисленным требованиям, вакцина может использоваться, в частности, для профилактических прививок, которые проводят за 2 месяца до ожидаемого увеличения заболеваемости троекратно с интервалами в 2-3 недель.

Перед употреблением вакцину, выпускаемую во флаконах по 30 мл, растворяют указанным в инструкции количеством дистиллированной или охлажденной до комнатной температуры кипяченой воды до первоначального (до сушки) объема. Разовая прививочная доза дивакцины против типа А и В в зависимости от возраста прививаемых колеблется в пределах 0,5-2 мл. Вводится дивакцина через рот с помощью пипетки или шприца без иглы.

Срок годности правильно транспортировавшейся и хранившейся в сухом затемненном месте при 2-4°С вакцины 1 год.

Убитые гриппозные вакцины издавна применяются для иммунопрофилактики гриппа во многих странах мира. В последнее время и в нашей стране широко используются два вида убитых корпускулярных (из целых вибрионов) вакцин, отличающихся по технологии очистки и концентрации.

Гриппозная хроматографическая инактивированная вакцина. В производстве этой вакцины для получения больших объемов вируссодержащего материала 10-12-дневных куриных эмбрионов, получаемых из специальных хозяйств, в аллантоисную полость помещают 0,3 мл взвеси полноценного по биологическим свойствам неаттенуированного штамма вируса гриппа с избранной антигенной структурой и инкубируют 48 ч при 34-37°С (вирус типа А) или 72 ч при 32-35°С (вирус типа В). Затем после охлаждения при 4°С в течение 1 суток яйца с жизнеспособными эмбрионами вскрывают, вируссодержащую аллантоисную жидкость отсасывают, собирают во флаконы или бутыли и после взятия пробы на стерильность добавляют мертиолат в соотношении 1:10 000. Вируссодержащую жидкость с консервантом можно длительно хранить при 4°С.

Предварительная очистка и концентрация препарата в зависимости от содержания вируса осуществляется с помощью 1-7% суспензии формалинизированных куриных эмбрионов. При этом используется способность вирусов гриппа, обладающих особым антигеном - гемагглютинином, при 2-4°С за 16-18 ч практически полностью адсорбироваться на эритроцитах. Затем отделяют несколько раз вирусы от эритроцитов путем элюции - отмывания вирусов физиологическим раствором в термостате при встряхивании. В конечном итоге получают осадок освобожденных от вирусов эритроцитов и практически чистую взвесь вирусных частиц в физиологическом растворе.

Окончательная очистка этой взвеси с параллельным увеличением концентрации вирусных частиц достигается путем ее фильтрации через хроматографические колонки специально подготовленными гранулами микропористого натриево-борсиликатного стекла. Способность этого стекла к избирательной фильтрации обусловлена тем, что при подогреве до 450-600°С оно расслаивается на двуокись кремния и борнокислого натрия, выделяющегося в виде мельчайших диффузно расположенных капель, размеры которых возрастают по мере увеличения времени и температуры нагревания. После охлаждения борнокислый натрий растворяют, протравливая стеклокислотой, и на месте капель остаются поры желаемого размера. Один грамм такого стекла содержит до 2000 км поровых канальцев. В полученном фильтрате вирусы инактивируют ультрафиолетовыми лучами в специальной установке и практически готовую вакцину после добавления 0,2% альбумина (наполнитель) разливают в ампулы или флаконы.

После этого вакцину контролируют на:

- стерильность, в том числе на полноту инактивации вируса гриппа;

- физические свойства;

- безвредность;

- содержание белка;

- специфическую активность;

- реактогенность и иммуногенность для людей.

По итогам контрольных исследований решается вопрос о возможности передачи данной серии вакцины в практику.

Выпускается вакцина в виде двух монопрепаратов типа А или В в ампулах по 0,5 мл и флаконах по 20-100 мл. Срок годности правильно транспортирующейся (самолетом или с нарочным) и хранящейся в сухом, затемненном месте при 2-4°С вакцины 1 год.

Применяется эта вакцина для прививок взрослым в возрасте от 18 лет. Вакцину при прививках населению вводят однократно шприцем или безыгольным инъектором внутрикожно в объеме 0,2 мл (до 320 ME) или подкожно в объеме 0,5 мл (до 800 ME) при вакцинации доноров. В процессе контролируемых эпидемиологических опытов установлено, что приведенные прививочные дозы обеспечивают формирование поствакцинального иммунитета, достаточного для защиты от гриппа более 70% привитых во время эпидемий, вызванных вирусам, антигенная структура которого тождественна структуре вакцинного штамма.

Гриппозная градиентная инактивированная вакцина. При изготовлении этой вакцины все этапы технологического процесса, связанные с получением больших объемов вируссодержащего материала, принципиально не отличаются от таковых при производстве хроматографической вакцины. Действительно, в той же последовательности осуществляется подготовка и проверка свойств посевного штамма неаттенуированного вируса гриппа, заражение его заданными дозами крупной партии куриных эмбрионов и, наконец, сбор вируссодержащей аллантоисной жидкости. Правда, в последнюю сразу же добавляют не мертиолат, а формалин и сульфат магния, которые выполняют одновременно функцию консерванта и агента, обеспечивающего инактивацию вируса.

Однако дальнейший процесс очистки и концентрации производится совершенно иначе. Так, вначале осуществляется предварительная очистка (осветление) вируссодержащей жидкости путем ее "мягкого" центрифугирования со скоростью 8000-12 000 об/мин при температуре 4-6°С. И лишь после этого производится окончательная очистка и концентрация осветленной аллантоисной жидкости путем проточного центрифугирования в градиенте плотности сахарозы со скоростью 33 000-35 000 об/мин и последующего изоплотностного центрифугирования в течение 1-2 ч при 75 000 g. Затем градиент плотности сахарозы вытесняется стерильным фосфатным буферным раствором, фракции градиента собирают в стерильные флаконы, после чего отбирают те из них, которые содержат 35-46% сахарозы и обладают гемагглютинирующей активностью не менее 16 000 гемагглютинирующих единиц (ГАЕ).

Отобранные фракции объединяют, разводят тем же буферным раствором до 16 000-64 000 ГАЕ и выдерживают при температуре 4-6°С 5-7 суток, в течение которых происходит полная инактивация вируса гриппа под действием ранее добавленного формалина. После контроля полноты инактивации полуфабрикат разводят фосфатным буферным раствором до 20 000- 40 000 ГАЕ и стерилизуют путем фильтрования в специальной установке под давлением. Профильтрованный материал (по сути дела готовую вакцину) разливают во флаконы, а при необходимости в ампулы и контролируют, подобно тому как контролируют хроматографическую гриппозную инактивированную вакцину, что уже было описано ранее. Если результаты контроля вакцины положительны, она выпускается для практического применения.

Срок годности вакцины при правильной транспортировке и хранении в сухом затемненном месте при 2- 8°С 1 год.

Вакцину вводят внутрикожно в объеме 0,1 мл.

Основными противопоказаниями к введению инактивированных гриппозных вакцин являются повышенная температура тела, острые инфекционные и системные заболевания, аллергозы, в том числе идиосинкразия к яйцам кур.

Существуют разные мнения о имеете живых и убитых вакцин в системе иммунопрофилактики гриппа. С учетом простоты патогенетически обоснованного метода иммунизации, а также ряда технологических и экономических особенностей производства потенциальные возможности живых гриппозных вакцин чрезвычайно высоки. Эффективность массовых прививок этими вакцинами несомненно существенно возрастет после усовершенствования техники иммунизации с гарантированной аппликацией прививочной дозы и технологии получения вакцинных штаммов, которая должна обеспечить возможность своевременного производства и применения препаратов, изготовленных на основе аттенуированных штаммов вируса с антигенной структурой, тождественной структуре эпидемических штаммов вирусов гриппа, иными словами, штаммов, вызывающих развитие эпидемий гриппа. Не исключено, что именно возможность оперативного получения убитых гриппозных вакцин из не требующих аттенуации эпидемических штаммов вируса гриппа, а также методика их введения, гарантирующая аппликацию строго установленной оптимальной прививочной дозы, а следовательно и формирование напряженного поствакцинального иммунитета, определили широкое применение этих вакцин, эффективность которых не вызывает сомнений.


Еще по теме:


Алексанндр, 06.09.2018 06:19:02
Вопрос привовок для прифилактики гриппа давно используется и эффективно работает в период распространения массовых заболеваний взрослого и детского населения.Многие,не понимая ёё полезность самоустраняются от прививок,ссылаясь на размытость достоверной информации и в интернет-посылах.
  % неохвана прививками  напрямую влияет на % заболеваемости и осложнений.Имеющиеся противопоказания также необходимо
учитывать.
   Считаем,что в период  распространения целесообразно организовать правильно противоэпидемическую защиту,своевременно изолировать больных от групп контакта ,особенно в школьных коллективах и в среде студентов Вузов ине ориентировать на порог
заболеваний для наложения карантина.Думаем ,что в  период ежегодных "пиков" заболеваемости гриппа ,ОРВ целесоообразно
делать ограничения периода обучения школьников и студентов .Надеемся ,что профилактическая вакцин- профилактика и др.меры положительно дадут свои результаты..... (Центр эпидемиологии и гогиены МАИТЗ.Самара,Россия).
Ваше имя:
Защита от автоматических сообщений:
Защита от автоматических сообщений Символы на картинке: