Лабораторная диагностика сифилиса


В начале заболевания сифилисом производят исследования на бледную трепонему, а в дальнейшем применяют различные серологические реакции.

Бледную трепонему, находящуюся в тканевых щелях между волокнами соединительной ткани, вокруг лимфатических сосудов и внутри их, ищут в тканевой жидкости - серуме, которую получают путем раздражения высыпаний первичного и вторичного сифилиса или элементов сыпи, подозрительных на сифилис (в особенности расположенных на половых органах). Эрозию, язву или другой элемент сыпи (например, мокнущую папулу) очищают ватным тампоном, пропитанным изотоническим раствором натрия хлорида. Платиновую петлю или металлическую лопаточку, прокаленные на огне и остуженные, прикладывают к поверхности эрозии или язвы и к ее краям и раздражают до получения прозрачной жидкости. Каплю последней наносят на предметное стекло, накрывают покровным стеклом и исследуют под микроскопом. В случае невозможности взять материал из отделяемого язвы производят пункцию близлежащих лимфатических узлов с помощью слегка затупленной иглы, надетой на шприц с плотно пригнанным поршнем. Путем оттягивания поршня шприца насасывают несколько капель жидкости, которую и подвергают исследованию.

Лучшим методом является микроскопия в темном поле зрения. В основу этого метода положен известный феномен: яркий свет проникает через узкую щель в темное помещение и вызывает свечение пылинок. Исследование проводят с помощью специального темно полюсного конденсора при объективе 40 и окуляре 10. Следует избегать примеси крови к препарату, так как это затрудняет обнаружение трепонем. При рассматривании препарата могут быть обнаружены другие виды трепонем, которые необходимо отличать от бледной трепонемы.

Лабораторная диагностика сифилисаВ нашей стране, согласно существующей инструкции, используются стандартные серологические реакции - реакция Вассермана и две осадочные: Кана и цитохолевая. Реакция Вассермана ставится с тремя антигенами. В связи со сложным мозаичным антигенным составом бледной трепонемы, ответ на ее внедрение в организме индуцируется комплекс антител. В настоящее время известно 6 фракций антигенных комплексов: протеиновая, полисахаридная, липоидная, идентичная кардиолипину, липоидная, близкая к липоидам здоровых тканей человека и животных, флюоресцирующая и иммобилизующая. В каждом периоде сифилиса образуются различные антитела и у каждого больного - в индивидуальном соотношении. Наиболее рано появляются флюоресцирующие антитела, затем антитела на протеиновые антигены, затем - реагенты на липоидные и полисахаридные антигены и в последнюю очередь - иммобилизины. Учитывая эти закономерности, для диагностики сифилитической инфекции на различных этапах ее развития используют комплекс серологических реакций: КСР, РИФ и РИБТ.

Широко применяется в реакции Вассермана кардиолипиновый антиген, обладающий большой чувствительностью, что доказано рядом авторов на большом материале. Реакция Вассермана может давать ложноположительные результаты, которые иногда наблюдаются у больных лепроматозным типом лепры, а также при некоторых лихорадочных состояниях, вызванных возвратным тифом, скарлатиной, гриппом, оспой. Ложноположительные результаты могут иметь место при злокачественных опухолях, нарушениях липидного обмена, очагах хронической инфекции, в последние месяцы беременности и в первые дни после родов, при алкогольном опьянении, во время хлороформного наркоза. Кроме того, возможны технические ошибки при хранении крови, при постановке реакции или в результате использования недоброкачественных ингредиентов.

РИБТ предложена в 1949 г. Нельсоном и Майером. Поскольку этой реакцией выявляются антитела, вызывающие неподвижность бледных трепонем, она получила название реакции иммобилизации бледных трепонем. По данным ряда авторов, РИБТ является высокоспецифичной и очень чувствительной реакцией. Она особенно показана для установления диагноза неведомого сифилиса, в частности у беременных. Ценность ее велика при распознавании ложноположительных результатов стандартных серологических реакций, а также при постановке ретроспективного диагноза сифилиса. РИБТ не может свидетельствовать об успешности терапии, так как она негативируется значительно позднее стандартных серологических реакций, и только отрицательный результат, полученный при повторном исследовании, как правило, свидетельствует об отсутствии сифилитической инфекции в результате излеченности. Конечно, как любая биологическая реакция, РИБТ может дать неспецифический результат, но это, по данным Н. М. Овчинникова, бывает крайне редко.

Для серодиагностики сифилиса используют также РИФ, предложенную в 1957 г. Диконом, Фалькони и Гаррисом. Она основана на выявлении в сыворотке больных сифилисом флюоресцирующих антител и обладает высокой чувствительностью и специфичностью. Ее применяют для распознавания ложноположительных стандартных серологических реакций, а также ложноположительных данных РИБТ. Модификации этой реакции в виде РИФ-200 и РИФ-абс повышают ее специфичность. Так, Н. М. Овчинников и В. Н. Беднова показали, что наибольшей специфичностью обладает РИФ-200. РИФ-10 может быть использована для серологической диагностики первичного сифилиса. РИФ является одной из наиболее достоверных реакций для диагностики всех форм сифилиса. РИФ-10, как показали исследования этих же авторов, более чувствительна при диагностике поздних форм сифилиса. Преимуществом РИФ является большая простота ее постановки, так как не требуется живых бледных трепонем, но эта реакция не может быть использована для оценки влияния лечения и установления излеченности, так как она подобно РИБТ остается длительно положительной и после полноценного лечения.

Как указывалось выше, у беременных могут быть получены резкоположительные результаты реакции Вассермана при отсутствии каких-либо клинических признаков сифилиса и указаний на сифилис в анамнезе. В таких случаях требуется повторное проведение реакции Вассермана, осадочных реакций и РИБТ, и если все они дают положительный результат, беременную считают больной сифилисом и подвергают специфическому лечению. Конечно, одновременно должны быть обследованы муж и другие члены семьи больной для исключения у них сифилиса. В ряде случаев для уточнения диагноза может служить постановка реакции Вассермана по количественному методу.

При серологическом обследовании новорожденного следует иметь в виду возможность ложноположительных КСР в первые 2 недели после родов, в таких случаях стандартные серологические реакции обычно резкоположительны, хотя исключения возможны. Что же касается РИБТ, то о ее значении в серологической диагностике врожденного сифилиса высказываются различные точки зрения, так как известно, что иммобилизующие антитела могут исчезнуть без лечения через 6 месяцев, в то время как пассивно переданные реагины не могут быть определены уже через 3 мес. Если РИБТ у беременной женщины, лечившейся в прошлом по поводу сифилиса, положительна, ей необходимо провести профилактическое лечение во время беременности, независимо от того, какая беременность по счету наступила после окончания лечения. Установлено, что РИБТ при позднем врожденном сифилисе длительно остается положительной. В то же время имеют место и такие случаи, когда у больных врожденным сифилисом отрицательная РИБТ не может исключить инфекции, что объясняют недостатком иммобилизинов в крови. Положительная РИБТ подтверждает наличие сифилитической инфекции, но необходимо иметь в виду возможность передачи антител от матери, а это можно установить только при постановке РИБТ спустя 6 месяцев после родов.

Несмотря на давнее использование серологических реакций и их несомненно важное диагностическое значение, они все же не дают полной информации о сложных механизмах клеточных и гуморальных защитных реакций в организме больных сифилисом. Поэтому в настоящее время предпринято изучение возможности использования для ранней диагностики сифилиса. По данным ряда авторов, эти реакции являются наиболее специфичными для выявления сифилиса, так как они основаны на характерной инфекционно-аллергической активности клеточных и гуморальных факторов иммунитета. На первом этапе проникновения бледной трепонемы, еще до возникновения первичного аффекта, происходит активное участие в реакциях клеточного типа лимфоцитов, нейтрофилов, макрофагов и плазматических клеток. Система Т-иммунитета проявляется кооперативным участием Т- и В-лимфоцитов. Оценка функционирования В-системы производится по количественному определению иммуноглобулинов методом радиальной иммунодиффузии в теле по Манчини. На ранних стадиях формирования сифилитической инфекции наблюдается увеличение концентрации IgM, во вторичном периоде отмечается нарастание IgA и IgG, а при скрытых формах обнаруживают в избытке IgG. Однако наличие антител обеспечивает лишь частичную резистентность, так как трепонема способна проникать в клетки и, таким образом, избегать воздействия циркулирующих антител. В процессе лечения одновременно с уменьшением титра реагинов уменьшается и содержание антител типа IgG, IgA и IgM, участвующих в образовании циркулирующих иммунных комплексов, концентрация которых увеличивается во вторичном периоде и достигает максимума при рецидивном течении процесса.

Клеточные механизмы иммунитета исследовались методами розетко-образования, бласттрансформации лимфоцитов, спонтанной миграции нейтрофилов, продукции фактора, ингибирующего миграцию лейкоцитов, в ответ на фитогемагглютинин (ФГА), трепонемный и кардиолипиновый антигены. Изучение таких показателей Т-системы иммунитета, как Е-розеткообразующие клетки (относительное и абсолютное количество), степень ингибиции миграции лейкоцитов и макрофагов, спонтанной миграции нейтрофилов и бласттрансформации лимфоцитов, выявило дефицит клеточного звена иммунитета, постепенно нарастающий к периоду вторичного свежего сифилиса.

Наличие иммуносупрессии в период первичного серонегативного течения сифилиса побудило ряд авторов полагать, что Treponema pallidum обладает естественной способностью подавлять иммунный ответ пораженного макроорганизма, поэтому как первичная, так и вторичная стадии сифилиса характеризуются состоянием низкой резистентности. Как было установлено Ю. К. Скрипкиным, состояние иммуносупрессии может сочетаться с высоким уровнем аллергической реактивности по немедленно-замедленному типу гиперчувствительности. У больных сифилисом это положение иллюстрируется клеточной реактивностью, констатируемой реакцией агломерации лейкоцитов (РАЛ) и реакцией аутоиммунного локального гемолиза (РАЛГ). Особенно четкие положительные результаты РАЛ и РАЛГ на трепонемный антиген были получены у больных заразными формами сифилиса, начиная от первичного серонегативного периода и коррелируя с дальнейшим прогрессивным течением болезни. Таким образом, исследование факторов гуморального и клеточного иммунитета может способствовать выявлению характера иммуносупрессии и степени гиперчувствительности с аутосенсибилизацией, а это имеет значение в проведении рационального лечения, поскольку позволяет дополнять антибиотикотерапию как иммуностимулирующими препаратами, так и гипосенсибилизирующими средствами.

Также рекомендуем ознакомиться со статьями: Сифилис плода, Врожденный сифилис у детей, Симптомы сифилиса, Лечение сифилиса.


Еще по теме:




Ваше имя:
Защита от автоматических сообщений:
Защита от автоматических сообщений Символы на картинке: