Холерная вакцина
Эти вакцины практически являются как бы ровесниками брюшнотифозных вакцин, так как их начали применять вскоре после прививок против брюшного тифа. Неудивительно, что вначале принципы изготовления холерных и брюшнотифозных вакцин существенно не различались. В настоящее время в большинстве стран мира с целью иммунопрофилактики холеры применяют убитую корпускулярную холерную вакцину, которая рекомендуется ВОЗ для проведения прививок по эпидемическим показаниям, а также для вакцинации выезжающих в неблагополучные по холере регионы, где риск заражения этой инфекционной болезнью достаточно высок. Однако сравнительно небольшой и к тому же кратковременный поствакцинальный иммунитет, формирующийся после прививок убитыми корпускулярными вакцинами, видимо, и послужил причиной поиска более эффективных препаратов и, в частности, разработки широко применяющейся в нашей стране химической холерной вакцины, известной под названием "холероген-анатоксин" и, следовательно, изготовленной на основе очищенных антигенов холерных вибрионов. В связи с этим принципы технологии производства корпускулярной и химической холерных вакцин существенно различаются.
Холерная вакцина относится к числу убитых корпускулярных вакцин и готовится на основе вирулентных штаммов холерного вибриона классического биотипа или биотипа Эль-Тор серотипов Инаба и Огава, инактивированных нагреванием или формалином. В процессе производства, в частности гретой вакцины, маточные культуры холерных вибрионов, которые длительно сохраняются в высушенном виде, вначале подготавливают или, как говорят, восстанавливают путем ряда последовательных пересевов на среды обогащения, плотные и полужидкие агаровые среды и, наконец, на жидкие среды. Убедившись в полноценности морфологических и всего спектра биологических свойств восстановленных штаммов, их бульонные культуры используют для посева на агаровые среды, залитые в кюветы автоматического культиватора микробов. Выращивание обоих серотипов того или иного биотипа холерных вибрионов осуществляется при 37°С в течение 18-20 ч при периодической аэрации стерильным подогретым воздухом. Выросшие культуры смывают с поверхности среды специальным сахарозо-желатиновым раствором, что необходимо для лиофилизации вакцины в последующем, и отдельные порции собирают в стерильные стеклянные бутыли. Затем чистую взвесь холерных вибрионов разводят под контролем стандарта мутности до концентрации 80 млрд. микробов серотипов Огава и Инаба в 1 мл. После этого сливают равные объемы моновалентной взвеси вибрионов серотипов Инаба и Огава и, получив бивалентную массу, а вернее - концентрированную суспензию вибрионов, разводят ее карболизированным физиологическим раствором до концентрации 16 млрд. микробов в 1 мл. Инактивация вибрионов осуществляется на водяной бане при 54°С в течение 1 ч и сопровождается осторожным покачиванием суспензии через каждые 5- 7 мин.
Следует отметить, что для полного исключения токсичности взвеси холерных вибрионов с момента ее получения до розлива во флаконы или ампулы должно пройти не менее 6 недель. После розлива суспензии во флаконы вакцину контролируют (в случае выпуска ее в жидком виде) либо насыпают в ампулы (в случае выпуска в сухом виде), лиофилизируют и затем уже контролируют.
В процессе контроля холерной вакцины изучают ее:
- стерильность (посевы на различные питательные среды должны оставаться стерильными);
- физические свойства (таблетка сухой формы вакцины должна полностью растворяться за 1-2 мин с образованием гомогенной взвеси без хлопьев и осадка; такой же должна быть и жидкая форма вакцины; остаточная влажность лиофилизированной вакцины не должна превышать 4%);
- полноценность антигенных свойств;
- токсичность ;
- иммуногенность;
- реактогенность для людей.
Если результаты контрольных исследований соответствуют приведенным требованиям, вакцину можно использовать для проведения прививок против холеры.
Транспортировка жидкой вакцины недопустима при температуре ниже 0°С, а при 20-30°С не должна превышать срок 10 суток. Лиофилизированная вакцина не может транспортироваться при температуре ниже 0°С более 1 мес. Хранить как жидкую, так и сухую вакцину следует в сухом, затемненном месте при 5- 10°С. При условии соблюдения указанных режимов транспортировки и складирования срок годности сухой гретой холерной вакцины 5 лет.
Выпускается сухая холерная вакцина в ампулах по 1 мл, прививки проводят подкожно шприцем или безыгольным инъектором двукратно с интервалом 7-10 дней указанными в наставлении дозами для иммунизации детей разного возраста, а также подростков старше 15 лет и взрослых.
Основными противопоказаниями к прививкам являются острые инфекционные болезни с учетом периода реконвалесценции и системные заболевания.
Химическая холерная вакцина "холероген - анатоксин". Этот препарат является смесью обезвреженных формалином токсина и О-антигена холерного вибриона - штамма Инаба линии Пакистан. Для получения препарата этот штамм (отличается от других штаммов стабильностью образования токсина), который хранится в высушенном виде в запаянных, ампулах, вначале подготавливают - тренируют путем пересевов на жидких и плотных питательных средах и лишь после этого, убедившись в полноценности его свойств, используют для посева на 250 л жидкой питательной среды, загруженной в реактор-культиватор, снабженный мешалкой. Выращивание в реакторе осуществляется в течение 10-11 часов при 34-37°С и постоянной аэрации подогретым до 30°С стерильным воздухом. С целью интенсификации токсинообразования осуществляется подкормка культуры заданными объемами 40% раствора глюкозы и 10% раствора аммиака в строго определенные сроки. После завершения цикла выращивания в бульонную культуру добавляют формалин до 0,6% концентрации для умерщвления вибрионов. Инактивация вибрионов наступает через 14-18 ч. Убедившись в полноте инактивации, бульонную взвесь вибрионов и их токсинов обрабатывают на суперцентрифуге со скоростью 8000 - 10 000 об/мин с последующим восполнением испарившегося формалина. Полученный формалинизированный безмикробный центрифугат собирают в бутыли и для полного обезвреживания токсина и О-антигена выдерживают при 10-12°С в течение 30-35 дней. После этого с помощью двукратного переосаждения сульфатом аммония в различных концентрациях в специальных реакторах вначале центрифугат освобождают от балластных фракций, а затем из раствора строго определенной оптической плотности высаливают необходимые антигены холерного вибриона, которые выпадают в осадок за 8-10 ч при 18-22°С. Полученный осадок отжимают на ультрацентрифуге, диализируют для освобождения от сульфата аммония и используют в качестве основы изготовления химической вакцины. Для этого взвесь антигенов разводят физиологическим раствором до концентрации белка, равной 5 мг/мл, стерилизуют фильтрованием через бактериальные свечи под вакуумом и разливают во флаконы или ампулы. Вакцину контролируют на:
- физические свойства;
- стерильность ;
- токсичность;
- холерогенность;
- антигенную активность;
- иммуногенность;
- содержание О-антигена;
- реактогенность для людей.
В случае соответствия результатов контрольных исследований перечисленным требованиям химическую холерную вакцину передают для практического применения.
Выпускается "холероген-анатоксин" в жидком или лиофилизированном виде в ампулах или флаконах.
Срок годности препарата в сухом виде 2 года, в жидком виде - 6 месяцев при условии правильной транспортировки и хранения в сухом затемненном месте при 5- 10°С.
Вводят препарат подкожно шприцем или с помощью безыгольного инъектора детям разного возраста, подросткам и взрослым в указанных в инструкции объемах оптимальных прививочных и ревакцинирующих доз.
Основными противопоказаниями к прививкам являются повышенная температура тела, острые инфекционные и системные заболевания.
Определение оптимальных прививочных дозировок химической холерной вакцины "холероген-анатоксин" для иммунизации детей, подростков и взрослых проводилось в серии контролируемых эпидемиологических опытов. Результаты последних учитывались при оптимизации производства препарата, когда, маневрируя, в частности, параметрами режима выращивания вибрионов, удалось уточнить их значения настолько, что это обеспечило в последующем получение серий строго сбалансированных по соотношению и величине содержания обоих антигенных компонентов (анатоксина и О-антигена) в единице объема. В свою очередь наличие в химической холерной вакцине указанных антигенов делает ее патогенетически неизмеримо более ценной, чем все еще традиционно широко применяемая убитая корпускулярная вакцина, которая лишена способности вызывать у привитых ею образование антитоксинов, т. е. практически не защищает их в случае заболевания от интоксикации, основы ведущего и наиболее грозного для здоровья симптома холеры (массивной утраты жидкости), известного под названием алгида. Напротив, прививки химической холерной вакциной "холероген-анатоксин" сопровождаются формированием как антибактериального, так и антитоксического иммунитета, напряженность которого зачастую выше постинфекционного иммунитета, регистрируемого у переболевших холерой и, следовательно, обеспечившего их выздоровление.
Описанием основных принципов получения и свойств современных холерных вакцин мы завершим обзор препаратов для иммунопрофилактики антропонозов - группы инфекционных заболеваний, которыми в естественных условиях болеют только люди, так как единственным, как говорят, хозяином их возбудителей, а следовательно и источником инфекции, является человек. Однако известно, что из числа огромной группы зоонозов - инфекционных болезней животных - рядом заболеваний может заразиться человек, хотя, естественно, основными хозяевами их возбудителей являются разные животные, чаще всего обитающие в пределах определенных территорий, так называемых природных очагов этих болезней. С целью иммунопрофилактики чумы, туляремии, бруцеллеза, клещевого энцефалита, лептоспироза, сибирской язвы и лихорадки Ку в нашей стране издавна применяются соответствующие вакцины.
Холерная вакцина относится к числу убитых корпускулярных вакцин и готовится на основе вирулентных штаммов холерного вибриона классического биотипа или биотипа Эль-Тор серотипов Инаба и Огава, инактивированных нагреванием или формалином. В процессе производства, в частности гретой вакцины, маточные культуры холерных вибрионов, которые длительно сохраняются в высушенном виде, вначале подготавливают или, как говорят, восстанавливают путем ряда последовательных пересевов на среды обогащения, плотные и полужидкие агаровые среды и, наконец, на жидкие среды. Убедившись в полноценности морфологических и всего спектра биологических свойств восстановленных штаммов, их бульонные культуры используют для посева на агаровые среды, залитые в кюветы автоматического культиватора микробов. Выращивание обоих серотипов того или иного биотипа холерных вибрионов осуществляется при 37°С в течение 18-20 ч при периодической аэрации стерильным подогретым воздухом. Выросшие культуры смывают с поверхности среды специальным сахарозо-желатиновым раствором, что необходимо для лиофилизации вакцины в последующем, и отдельные порции собирают в стерильные стеклянные бутыли. Затем чистую взвесь холерных вибрионов разводят под контролем стандарта мутности до концентрации 80 млрд. микробов серотипов Огава и Инаба в 1 мл. После этого сливают равные объемы моновалентной взвеси вибрионов серотипов Инаба и Огава и, получив бивалентную массу, а вернее - концентрированную суспензию вибрионов, разводят ее карболизированным физиологическим раствором до концентрации 16 млрд. микробов в 1 мл. Инактивация вибрионов осуществляется на водяной бане при 54°С в течение 1 ч и сопровождается осторожным покачиванием суспензии через каждые 5- 7 мин.
Следует отметить, что для полного исключения токсичности взвеси холерных вибрионов с момента ее получения до розлива во флаконы или ампулы должно пройти не менее 6 недель. После розлива суспензии во флаконы вакцину контролируют (в случае выпуска ее в жидком виде) либо насыпают в ампулы (в случае выпуска в сухом виде), лиофилизируют и затем уже контролируют.
В процессе контроля холерной вакцины изучают ее:
- стерильность (посевы на различные питательные среды должны оставаться стерильными);
- физические свойства (таблетка сухой формы вакцины должна полностью растворяться за 1-2 мин с образованием гомогенной взвеси без хлопьев и осадка; такой же должна быть и жидкая форма вакцины; остаточная влажность лиофилизированной вакцины не должна превышать 4%);
- полноценность антигенных свойств;
- токсичность ;
- иммуногенность;
- реактогенность для людей.
Если результаты контрольных исследований соответствуют приведенным требованиям, вакцину можно использовать для проведения прививок против холеры.
Транспортировка жидкой вакцины недопустима при температуре ниже 0°С, а при 20-30°С не должна превышать срок 10 суток. Лиофилизированная вакцина не может транспортироваться при температуре ниже 0°С более 1 мес. Хранить как жидкую, так и сухую вакцину следует в сухом, затемненном месте при 5- 10°С. При условии соблюдения указанных режимов транспортировки и складирования срок годности сухой гретой холерной вакцины 5 лет.
Выпускается сухая холерная вакцина в ампулах по 1 мл, прививки проводят подкожно шприцем или безыгольным инъектором двукратно с интервалом 7-10 дней указанными в наставлении дозами для иммунизации детей разного возраста, а также подростков старше 15 лет и взрослых.
Основными противопоказаниями к прививкам являются острые инфекционные болезни с учетом периода реконвалесценции и системные заболевания.
Химическая холерная вакцина "холероген - анатоксин". Этот препарат является смесью обезвреженных формалином токсина и О-антигена холерного вибриона - штамма Инаба линии Пакистан. Для получения препарата этот штамм (отличается от других штаммов стабильностью образования токсина), который хранится в высушенном виде в запаянных, ампулах, вначале подготавливают - тренируют путем пересевов на жидких и плотных питательных средах и лишь после этого, убедившись в полноценности его свойств, используют для посева на 250 л жидкой питательной среды, загруженной в реактор-культиватор, снабженный мешалкой. Выращивание в реакторе осуществляется в течение 10-11 часов при 34-37°С и постоянной аэрации подогретым до 30°С стерильным воздухом. С целью интенсификации токсинообразования осуществляется подкормка культуры заданными объемами 40% раствора глюкозы и 10% раствора аммиака в строго определенные сроки. После завершения цикла выращивания в бульонную культуру добавляют формалин до 0,6% концентрации для умерщвления вибрионов. Инактивация вибрионов наступает через 14-18 ч. Убедившись в полноте инактивации, бульонную взвесь вибрионов и их токсинов обрабатывают на суперцентрифуге со скоростью 8000 - 10 000 об/мин с последующим восполнением испарившегося формалина. Полученный формалинизированный безмикробный центрифугат собирают в бутыли и для полного обезвреживания токсина и О-антигена выдерживают при 10-12°С в течение 30-35 дней. После этого с помощью двукратного переосаждения сульфатом аммония в различных концентрациях в специальных реакторах вначале центрифугат освобождают от балластных фракций, а затем из раствора строго определенной оптической плотности высаливают необходимые антигены холерного вибриона, которые выпадают в осадок за 8-10 ч при 18-22°С. Полученный осадок отжимают на ультрацентрифуге, диализируют для освобождения от сульфата аммония и используют в качестве основы изготовления химической вакцины. Для этого взвесь антигенов разводят физиологическим раствором до концентрации белка, равной 5 мг/мл, стерилизуют фильтрованием через бактериальные свечи под вакуумом и разливают во флаконы или ампулы. Вакцину контролируют на:
- физические свойства;
- стерильность ;
- токсичность;
- холерогенность;
- антигенную активность;
- иммуногенность;
- содержание О-антигена;
- реактогенность для людей.
В случае соответствия результатов контрольных исследований перечисленным требованиям химическую холерную вакцину передают для практического применения.
Выпускается "холероген-анатоксин" в жидком или лиофилизированном виде в ампулах или флаконах.
Срок годности препарата в сухом виде 2 года, в жидком виде - 6 месяцев при условии правильной транспортировки и хранения в сухом затемненном месте при 5- 10°С.
Вводят препарат подкожно шприцем или с помощью безыгольного инъектора детям разного возраста, подросткам и взрослым в указанных в инструкции объемах оптимальных прививочных и ревакцинирующих доз.
Основными противопоказаниями к прививкам являются повышенная температура тела, острые инфекционные и системные заболевания.
Определение оптимальных прививочных дозировок химической холерной вакцины "холероген-анатоксин" для иммунизации детей, подростков и взрослых проводилось в серии контролируемых эпидемиологических опытов. Результаты последних учитывались при оптимизации производства препарата, когда, маневрируя, в частности, параметрами режима выращивания вибрионов, удалось уточнить их значения настолько, что это обеспечило в последующем получение серий строго сбалансированных по соотношению и величине содержания обоих антигенных компонентов (анатоксина и О-антигена) в единице объема. В свою очередь наличие в химической холерной вакцине указанных антигенов делает ее патогенетически неизмеримо более ценной, чем все еще традиционно широко применяемая убитая корпускулярная вакцина, которая лишена способности вызывать у привитых ею образование антитоксинов, т. е. практически не защищает их в случае заболевания от интоксикации, основы ведущего и наиболее грозного для здоровья симптома холеры (массивной утраты жидкости), известного под названием алгида. Напротив, прививки химической холерной вакциной "холероген-анатоксин" сопровождаются формированием как антибактериального, так и антитоксического иммунитета, напряженность которого зачастую выше постинфекционного иммунитета, регистрируемого у переболевших холерой и, следовательно, обеспечившего их выздоровление.
Описанием основных принципов получения и свойств современных холерных вакцин мы завершим обзор препаратов для иммунопрофилактики антропонозов - группы инфекционных заболеваний, которыми в естественных условиях болеют только люди, так как единственным, как говорят, хозяином их возбудителей, а следовательно и источником инфекции, является человек. Однако известно, что из числа огромной группы зоонозов - инфекционных болезней животных - рядом заболеваний может заразиться человек, хотя, естественно, основными хозяевами их возбудителей являются разные животные, чаще всего обитающие в пределах определенных территорий, так называемых природных очагов этих болезней. С целью иммунопрофилактики чумы, туляремии, бруцеллеза, клещевого энцефалита, лептоспироза, сибирской язвы и лихорадки Ку в нашей стране издавна применяются соответствующие вакцины.