Исследования крови при болезнях кроветворных органов

Счетные камеры, которые служат для счета форменных элементов крови, представляют собой толстое стекло, середина которого занята счетной пластинкой. В камерах более старого образца счетная пластинка круглая, окружена кольцевидным желобком, который заключен в квадратную рамку. При этом поверхность счетной пластинки, середина которой разграфлена в виде сетки, находится ниже поверхности рамки точно на 1/10 мм. Если рамку накрыть покровным стеклом, то между нижней поверхностью его и счетной пластинкой остается щель высотой в 1/10 мм, которая, собственно, и является камерой в узком смысле слова. Здесь и располагается капля разведенной крови, предназначенная для подсчета. Но уверенность в том, что высота щели, а значит и столбика жидкости в ней действительно равняется 1/10 мм, может создаться только в случае полного прилегания покровного стекла к рамке, или, как принято говорить, если покровное стекло «хорошо притерто». Доказательством же этого служит появление так называемых ньютоновых колец в виде радужного муарового рисунка.

Камеры, получающие все большее распространение в настоящее время, устроены несколько иначе. В них счетная пластинка, также несущая, на себе сетку, имеет вид прямоугольника, расположенного поперек всего толстого стекла, от края до края. Два желобка проходят по бокам пластинки; снаружи от них располагаются поперечные опорные пластинки, на которые ложится покровное стекло. Очень удобны камеры, в которых средняя пластинка разделена поперечным желобком пополам. В них получается две счетные площадки, из которых каждая несет на себе сетку. И здесь, конечно, поверхность счетной средней пластинки на 1/10 мм ниже опорных боковых.

Разница в устройстве камер влечет за собой и некоторую разницу в пользовании ими, в способе «зарядки» их исследуемой жидкостью. В камеры первого образца, в которых щель герметически закрывается, сначала вносится капля жидкости, а затем она накрывается покровным стеклом. Камеры другого типа и после накладывания покровного стекла остаются открытыми с обоих концов счетной пластинки, благодаря чему при работе с ними сначала притирается (до ньютоновых колец) покровное стекло, затем кончик капилляра подносится к зияющей щели между покровным стеклом и средней пластинкой (а не к желобку, конечно). Выступившая из смесителя капля крови втягивается в щель по капиллярности и распределяется равномерным слоем до другого конца.

«Притирание» покровного стекла к рамке камеры (в одних случаях) или опорным пластинкам (в других) производится путем надавливания на стекло с обеих сторон мякотью кончиков указательных пальцев, если камера остается лежать на столе, или обоими большими пальцами при захватывании камеры руками.

Что касается названий камер, то следует иметь в виду, что они определяются устройством сетки. Так как камеры первого указанного образца в свое время имели сетку Тома (а также Тюрка, Предтеченского и др.), а камеры второго образца выпускались Бюркером с его сеткой, то до сих пор сохранилась привычка называть их этими именами. В действительности, сейчас широко распространены камеры конструкции Бюркера, но с сеткой Тома (Thoma), которые и называются камерами Тома.

Сетка Тома, занимающая площадь в 1 мм2, состоит из 400 маленьких квадратов, длина стороны которых равняется 1/20 мм, а площадь, следовательно, 1/400 мм2. Так как ориентироваться в таком огромном количестве совершенно одинаковых квадратов было бы немыслимо, они группируются по 16 вместе, составляя так называемые большие квадраты, причем каждый из больших квадратов отделен от соседнего рядом маленьких квадратов, разделенных вдоль дополнительными линиями. Таких больших квадратов во всей сетке тоже 16. В сетках других систем основным элементом являются те же маленькие квадраты, но иначе сгруппированные.

Главный недостаток сетки Тома, из-за которого она должна считаться устаревшей, это ее малая площадь. В связи с этим возникла необходимость создания других сеток, из которых наиболее распространена сетка Тюрка, сетка Бюркера и, в последнее время особенно, сетка Горяева.

Подсчет эритроцитов производится следующим образом. «Заряжается» камера из смесителя, как говорилось выше. В течение приблизительно полминуты картина под микроскопом представляется туманной, пока взвешенные в жидкости эритроциты (для которых высота в 0,1 мм является значительной) не осядут на дно камеры. Изучение следует начать с малого увеличения, под которым легко убедиться, насколько равномерно распределились эритроциты. Если при этом выяснится, что некоторые участки густо усеяны ими, другие же заметна реже, такая капля в счет идти не может очевидно плохо было размешано содержимое смесителя. Счет эритроцитов производится под большим увеличением. В поле зрения при этом должен поместиться один больший квадрат, ограниченный по сторонам «коридорами» с дополнительной линией в середине. Должны быть сосчитаны все эритроциты, помещающиеся в нем. Считать подряд, не отрываясь, все эритроциты большого квадрата для начала трудно. Лучше всего отмечать эритроциты по рядам большого квадрата. Четыре цифры соответственно четырем рядам, записанные для удобства столбиком, будут обозначать число эритроцитов в одном большом квадрате. Так как клетки, лежащие на черте, с равным успехом могут оказаться присчитанными и к нижнему и к верхнему ряду, необходимо придерживаться одного порядка при подсчете; считать эритроциты, лежащие на левой линии, затем  на верхней и в середине. Таким образом сосчитывается 5 больших квадратов, причем лучше всего брать 4 угловых и последним  любой средний.

Все сказанное относится также и к способу подсчета эритроцитов с помощью сеток Тюрка и Горяева. При пользовании же сеткой Бюркера приходится поступать иначе: сосчитываются или 80 маленьких квадратов, располагающихся на перекрестках двойных линий, или, что менее громоздко,  20 прямоугольников, лежащих между маленькими квадратами, каждый из которых равен одному ряду гак называемого большого квадрата.

Для расчета нужно вспомнить, каков объем столбика жидкости, находящегося над каждым маленьким квадратом. Площадь его равна 1/400 мм2, высота камеры равняется 1/10 мм, следовательно объем пространства над маленьким квадратом составляет  1/4000 мм3. Зная, сколько эритроцитов содержится в 1 малом квадрате, легко сосчитать, сколько их в 1 мм3. Предположим, что в 5 больших квадратах или, иначе говоря, в 80 маленьких сосчитано 485 эритроцитов. На долю одного маленького квадрата приходится, следовательно, в 80 раз меньше, а на весь кубический миллиметр  в 4000 раз больше. Кроме того, нужно учесть, что кровь смесителем была разведена в 200 раз.

Вычисление цветового показателя. Цветовым показателем называется отношение количества гемоглобина к количеству эритроцитов, показывающее, каково среднее содержание гемоглобина, приходящееся на каждый эритроцит. Для вычисления его составляется следующая пропорция: найденное количество гемоглобина так относится к нормальному количеству гемоглобина, как найденное количество эритроцитов относится к нормальному их количеству.

Подсчет лейкоцитов. Для подсчета лейкоцитов кровь достаточно развести в 20 раз (а иногда даже всего в 10). Для разведения крови в данном случае нужна жидкость, которая бы, не изменяя лейкоцитов, позволила освободиться от эритроцитов, разрушила бы их.

Для взятия крови для подсчета лейкоцитов нужно приготовить следующее. 1) Смеситель для лейкоцитов, обеспечивающий возможность разведения в 10 и 20 раз. Следовательно, он должен иметь метки 0,5 и 1 (как и на смесителе для эритроцитов) на начальной части смесителя до расширения и метку 11 по ту сторону пузырька. На смеситель должна быть надета резиновая трубка. 2) болонка со слабым раствором уксусной кислоты, который, растворяя эритроциты, сохранит в целости лейкоциты. Обычно применяется 1/3%, 1/2% или 1% раствор ее. К раствору уксусной кислоты полезно прибавить 1 каплю 1 % водного раствора генцианвиолета. Это рекомендуется, во-первых, потому, что облегчает в дальнейшем подсчет лейкоцитов в камере, так как ядра их окрашиваются, и, во-вторых, потому, что при одновременном взятии и эритроцитов и лейкоцитов солонки, если они обе заполнены бесцветными жидкостями, могут оказаться перепутанными.

Само насасывание крови и разводящей жидкости производится совершенно так же, как при взятии эритроцитов. Важно помнить, что просвет канала у лейкоцитарного капилляра относительно широк, так что движения губ должны быть особенно осторожными; об этом же нужно помнить при вытирании кончика капилляра ваткой  жидкость легко может отсосаться. Смеситель нужно держать строго горизонтально, при размешивании закрывать отверстия пальцами и, наконец, при сбрасывании первых капель на тряпку и при внесении капли в камеру также слегка придерживать свободный конец капилляра пальцем, так как иначе все содержимое его может очень быстро вытечь. При исследовании количества лейкоцитов у лейкемиков иногда приходится разбавлять кровь больше чем в 20 раз. Тогда кровь берется в капилляр для эритроцитов до метки 1, что дает разведение в 100 раз.

Подсчет производится в камере. При работе с сеткой Тома сосчитываются лейкоциты со всей сетки, т. е. со всех 400 маленьких квадратов, включая и те, которые разделены дополнительной линией. Подсчет можно производить и под малым увеличением.

Точность результата достигается тем, что сосчитывают 3 - 4 капли, каждый раз «перезаряжая» камеру, после чего выводится средняя цифра.

Работа с сетками Тюрка и Бюркера освобождает от необходимости повторного заполнения камеры, так как площадь каждой из них равна площади девяти сеток Тома, т. е. 3600 маленьких квадратов. Сосчитываются обычно четыре участка, соответствующие четырем сеткам Тома, т. е. 1600 маленьким квадратам. Количество лейкоцитов, оказавшихся при этом, следует умножить на 50. Общая площадь сетки Горяева тоже равна 3600 маленьким квадратам. Они сгруппированы здесь в четкие большие квадраты, частью разграфленные, частью же «пустые». Для того, чтобы подсчитать лейкоциты, расположенные на пространстве, соответствующем 1600 маленьким квадратам, нужно, следовательно, сосчитать 100 больших квадратов. Удобнее всего брать для этой цели «пустые» квадраты, которые расположены группами по четыре; таких групп по всей сетке 25.
 
Исследование сухого окрашенного мазка крови. Техника приготовления мазка. Мазки делаются обычно на предметных стеклах. Стекла должны быть очень чистыми, обезжиренными, сохраняться в банке со спиртом. Перед употреблением их следует насухо вытереть чистой тряпочкой. Размазывается кровь на стекле или при помощи покровного стеклышка, или шлифованного предметного стекла с отломанным уголком, с тем чтобы мазок крови был обязательно уже стекла, на который он нанесен.

Мазок делается следующим образом. Свежая капля крови снимается поверхностью стекла у одного из концов его (при этом касаться стеклом кожи пальца не следует). Затем стекло захватывается указательным и большим пальцами левой руки так, чтобы конец его, у которого расположена капля, находился у указательного пальца. Покровное стеклышко нужно захватить теми же пальцами правой руки за самые уголки. Держа его ребром на предметном стекле под углом в 45° с наклоном в сторону капли, нужно подойти им к капле, дать ей растечься в углу между обоими стеклами, и быстрым, но спокойным движением продвинуть его по направлению к большому пальцу, причем позади покровного стеклышка потянется кровь в виде ровного тонкого мазка. Для того чтобы мазок удовлетворял необходимым условиям, т. е. был достаточно тонким, равномерным и длинным и чтобы форменные элементы при этом не оказались травматизированными и были равномерно распределены, нужно следующее: каплю взять надлежащей величины; ее нельзя толкать вперед, а нужно тянуть за стеклом; движения должны быть спокойными и быстрыми, и, наконец, покровное стеклышко нужно держать под острым углом к предметному, так как чем острее угол, тем тоньше получится мазок. Для быстрого высушивания мазка нужно несколько раз помахать стеклом в воздухе.
Дальнейшая обработка мазка сводится к фиксации его и окраске. При пользовании одними красками эти оба момента проводятся раздельно, при других  и окраска и фиксация происходят одновременно.

Окраска по Лейшману (Leishman) сопровождается одновременной фиксацией препарата. На высушенный мазок крови наливается по счету такое количество капель краски, которое достаточно, чтобы покрыть весь мазок. Через 3 минуты, не сливая краски, на него же наливают двойное количество капель воды; жидкости на мазке тщательно смешивают, наклоняя предметное стекло в разные стороны или дуя на поверхность жидкости через стеклянную трубочку. Через 15 минут мазок ополаскивается водой и высушивается.

Окраска по Романовскому - Гимза. Краска Романовского  Гимза (азур-эозин) сохраняется в виде раствора, который, однако, непосредственно перед применением следует развести в воде из расчета 15 капель краски (в зависимости от крепости данного раствора краски, определяемой на опыте) на 1 см3 воды. Вода должна быть нейтральной или слабощелочной реакции. Мазок, который предположено окрасить по Романовскому  Гимза, должен быть зафиксирован, для чего применяется или абсолютный метиловый спирт, который наливается на мазок на 35 минут, или смесь этилового спирта с эфиром, взятых поровну, под которой мазок находится 510 минут. По истечении указанного срока стекла с мазками устанавливаются вертикально на фильтровальную бумагу до высыхания. Раствор краски наливается на мазок по возможности, высоким слоем, на 25 - 30 минут, после чего мазок промывается струей воды и осторожно просушивается фильтровальной бумагой. Зернистость нейтрофилов при этом способе окраски нередко оказывается слабо выявленной, а протоплазма базофилов вовсе не окрашивается.

Окраска по Паппенгейму. На нефиксированный мазок крови наливается по счету капель краска Май-Грюнвальда (May-Grunwald) на 3 минуты, затем равное количество капель воды на 1 минуту; краска сливается, но мазок не споласкивается, а сразу же заливается краской Романовского - Гимза, приготовленной из расчета 3 капли ее на каждые 2 см3 воды. Через 10 минут мазок ополаскивается водой.

Страница 2 - 2 из 5
Начало | Пред. | 1 2 3 4 5 | След. | Конец