Выявление антител к структурам клеточного ядра при СКВ
Выявление антител к структурам клеточного ядра (АНФ) служит диагностическим критерием и имеет важное патогенетическое значение.
Наиболее распространен метод непрямой иммунофлюоресценции. Субстратом служат суспензии клеток человека или животных (лейкоциты, эпителий слизистых оболочек) либо замороженные срезы ткани почек и печени крыс. Благодаря применению не менее двух субстратов устраняются ошибки определения, связанные со специфичностью органа или вида. Мазки крови человека чаще дают неспецифические положительные реакции,- чем препараты экспериментальных животных. АНФ связываются со структурой ядра и после добавления меченной флюоресцентном антисыворотки к глобулину человека становятся отчетливо видимыми. Преимущество метода заключается в том, что не требуется дорогостоящей аппаратуры. Кроме того, все АНФ могут быть идентифицированы независимо от их специфичности. Проба бывает положительной почти в 100 % случаев, поэтому ее используют прежде всего как скрининг-тест для выявления лиц с подозрением на СКВ. Из-за сложных механизмов сенсибилизации при иммунофлюоресцентной микроскопии наблюдают разнохарактерные картины. Различают пять типичных реакций.
1) Гомогенная флюоресценция встречается наиболее часто и свидетельствует о наличии антител к нуклеопротеидам. Тем не менее, одновременно иногда выявляют антитела другой специфичности.
2) Периферическая флюоресценция регистрируется преимущественно в области ядерной мембраны, главным образом в период острой фазы заболевания. Она указывает на антителообразование к ДНК. Характерная картина представлена преимущественно периферической локализацией ДНК в неделящемся ядре.
3) Флюоресценция в виде пятна может быть более или менее выраженной. Для системной красной волчанки специфичны грубые изменения, в то время как мелкопятнистая флюоресценция чаще встречается при склеродермии и синдроме Шарпа, что, по-видимому, имеет разные причины.
Наиболее важны антитела к антигенам Sm и рибонуклеопротеида, Scl-1 и SS-B. При склеродермии эта реакция положительна почти в 80% случаев. Положительные результаты при болезни Рейно позволяют определять данный симптомокомплекс в качестве нетипичной ранней стадии склеродермии. В основе пятнистой иммунофлюоресцентной окраски при лейкозах и новообразованиях лежат другие иммунные реакции. Эти антитела направлены прежде всего против бластов ОМЛ, лимфоцитов, трансформированных под влиянием ФГА, и длительно культивируемых лимфобластоидных линий, но не против нормальных лимфоцитов. Очевидно, они направлены также против антигена пролиферирующих клеток. Их выявляют с помощью антикомплементарной иммунофлюоресценции.
4) Преимущественная флюоресценция в области ядрышек встречается относительно редко: иногда при склеродермии (реже, чем при СКВ) и в исключительных случаях при дерматомиозите, ревматоидном артрите и лимфосаркоме. Причиной ее является выработка антител к РНК.
5) Внеядерная флюоресценция. Ответственный антиген, по-видимому, происходит из структур ядра. Этот тип связывают с термином «хвост кометы» и наблюдают при исследовании сывороток, содержащих антитела к ДНК.
Во многих случаях картину флюоресценции нельзя отнести ни к одному из названных типов. Для дифференциального анализа применяют методику абсорбции, однако даже при типичной картине нельзя с уверенностью судить о специфичности антител. Антитела ни видо-, ни органоспецифичны, поэтому для их выявления можно использовать антигены человека и животных (как из нормальных, так и из опухолевых тканей). Между тем иногда антитела проявляют органоспецифичность. Антитела, специфичные к гранулоцитам, обнаруживают прежде всего при ревматоидном артрите, синдроме Фелти, реже при СКВ.
Для определения АНФ можно использовать субстраты тканей не только животных, но и человека (например, срезы органов и взвесь гранулоцитов). С помощью моноспецифических флюоресцентных антисывороток можно определить класс антител. АНФ могут также циркулировать в связанной форме и не улавливаться обычными методиками. В отдельных случаях их выявляют после обработки сыворотки дезоксирибонуклеазой и отщепления антител от соответствующих антигенов.
Иммуноблоттинг. Этот современный метод позволяет идентифицировать разные типы АНФ, однако использование его в клинической практике еще не дало достаточно информативных результатов (относительно характеристик полос).
Читать далее Выявление антител к антигенам клеточного ядра при СКВ
Наиболее распространен метод непрямой иммунофлюоресценции. Субстратом служат суспензии клеток человека или животных (лейкоциты, эпителий слизистых оболочек) либо замороженные срезы ткани почек и печени крыс. Благодаря применению не менее двух субстратов устраняются ошибки определения, связанные со специфичностью органа или вида. Мазки крови человека чаще дают неспецифические положительные реакции,- чем препараты экспериментальных животных. АНФ связываются со структурой ядра и после добавления меченной флюоресцентном антисыворотки к глобулину человека становятся отчетливо видимыми. Преимущество метода заключается в том, что не требуется дорогостоящей аппаратуры. Кроме того, все АНФ могут быть идентифицированы независимо от их специфичности. Проба бывает положительной почти в 100 % случаев, поэтому ее используют прежде всего как скрининг-тест для выявления лиц с подозрением на СКВ. Из-за сложных механизмов сенсибилизации при иммунофлюоресцентной микроскопии наблюдают разнохарактерные картины. Различают пять типичных реакций.
1) Гомогенная флюоресценция встречается наиболее часто и свидетельствует о наличии антител к нуклеопротеидам. Тем не менее, одновременно иногда выявляют антитела другой специфичности.
2) Периферическая флюоресценция регистрируется преимущественно в области ядерной мембраны, главным образом в период острой фазы заболевания. Она указывает на антителообразование к ДНК. Характерная картина представлена преимущественно периферической локализацией ДНК в неделящемся ядре.
3) Флюоресценция в виде пятна может быть более или менее выраженной. Для системной красной волчанки специфичны грубые изменения, в то время как мелкопятнистая флюоресценция чаще встречается при склеродермии и синдроме Шарпа, что, по-видимому, имеет разные причины.
Наиболее важны антитела к антигенам Sm и рибонуклеопротеида, Scl-1 и SS-B. При склеродермии эта реакция положительна почти в 80% случаев. Положительные результаты при болезни Рейно позволяют определять данный симптомокомплекс в качестве нетипичной ранней стадии склеродермии. В основе пятнистой иммунофлюоресцентной окраски при лейкозах и новообразованиях лежат другие иммунные реакции. Эти антитела направлены прежде всего против бластов ОМЛ, лимфоцитов, трансформированных под влиянием ФГА, и длительно культивируемых лимфобластоидных линий, но не против нормальных лимфоцитов. Очевидно, они направлены также против антигена пролиферирующих клеток. Их выявляют с помощью антикомплементарной иммунофлюоресценции.
4) Преимущественная флюоресценция в области ядрышек встречается относительно редко: иногда при склеродермии (реже, чем при СКВ) и в исключительных случаях при дерматомиозите, ревматоидном артрите и лимфосаркоме. Причиной ее является выработка антител к РНК.
5) Внеядерная флюоресценция. Ответственный антиген, по-видимому, происходит из структур ядра. Этот тип связывают с термином «хвост кометы» и наблюдают при исследовании сывороток, содержащих антитела к ДНК.
Во многих случаях картину флюоресценции нельзя отнести ни к одному из названных типов. Для дифференциального анализа применяют методику абсорбции, однако даже при типичной картине нельзя с уверенностью судить о специфичности антител. Антитела ни видо-, ни органоспецифичны, поэтому для их выявления можно использовать антигены человека и животных (как из нормальных, так и из опухолевых тканей). Между тем иногда антитела проявляют органоспецифичность. Антитела, специфичные к гранулоцитам, обнаруживают прежде всего при ревматоидном артрите, синдроме Фелти, реже при СКВ.
Для определения АНФ можно использовать субстраты тканей не только животных, но и человека (например, срезы органов и взвесь гранулоцитов). С помощью моноспецифических флюоресцентных антисывороток можно определить класс антител. АНФ могут также циркулировать в связанной форме и не улавливаться обычными методиками. В отдельных случаях их выявляют после обработки сыворотки дезоксирибонуклеазой и отщепления антител от соответствующих антигенов.
Иммуноблоттинг. Этот современный метод позволяет идентифицировать разные типы АНФ, однако использование его в клинической практике еще не дало достаточно информативных результатов (относительно характеристик полос).
Читать далее Выявление антител к антигенам клеточного ядра при СКВ